云南Seplife? LXPM SP 5504M

基本信息

Seplife? LXPM SP 5504M層析介質是以聚丙烯酸酯為基質，在表面進行了親水性改性再鍵合了強酸性離子交換基團，具有載量高、化學穩(wěn)定性好、機械強度大、非特異性吸附小等特點，具有卓越的生物相容性和柱床穩(wěn)定性，可以提供更快的流速，特別適合大規(guī)模制備的應用，顯著提高了下游純化工藝的生產效率，可以降低成本……

產品描述
產品屬性參數(shù)
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Seplife? LXPM SP 5504M層析介質是以聚丙烯酸酯為基質，在表面進行了親水性改性再鍵合了強酸性離子交換基團，具有載量高、化學穩(wěn)定性好、機械強度大、非特異性吸附小等特點，具有卓越的生物相容性和柱床穩(wěn)定性，可以提供更快的流速，特別適合大規(guī)模制備的應用，顯著提高了下游純化工藝的生產效率，可以降低成本，創(chuàng)造出較好的經濟效益，廣泛應用于抗體、蛋白質、多肽、核酸（寡核苷酸）、病毒，胰島素等生物分子的捕獲、中度純化、精細純化。

骨架	聚甲基丙烯酸甲酯
外觀	白色不透明球狀顆粒
功能基團	-O-R-O-(CH2)3-SO3-
交換容量（mmol/mL）	0.13-0.17
平均粒徑（μm）	80
孔徑（?）	1000
載量（mg/ml,Lysozyme）	≧110
耐壓流速(cm/h)	300-1000，22mm×20cm,3bar
壓縮因子	≦1.05
耐壓（Mpa）	0.8
存儲防腐劑	20%乙醇溶液，150mol/l NaCl
再生	0.5-2M NaCl溶液
清洗	0.1-0.5M NaOH溶液（或者50%乙醇）
穩(wěn)定性	耐酸、耐堿、不溶于甲醇、乙醇、甲苯、DMSO、DMF、正庚烷等有機溶劑。

使用方法

3.1 裝柱

勻漿濃度等于靜置膠體積除以除以勻漿后的總體積。采用0.5M NaCl勻漿可獲得最佳裝柱效果，其濃度為60%-70%。方法如下：

1)色譜柱的柱體積 V，V=Ac×L，Ac=π×r2。

Ac：色譜柱橫截面積；L:色譜柱高度；r：色譜柱半徑。

2) 攪動介質形成勻漿液，量取所需質量或體積。其為柱體積的1.2倍左右，防止收縮。

3）用 0.5 M NaCl 溶液置換20%乙醇，平衡過夜。

4）裝柱之前，用 0.5 M NaCl 溶液調整勻漿濃度為 65 ~ 70%；將勻漿一次性倒入層析柱，沉降平衡后標注高度。

5）將分配器裝入，調節(jié)高度使得壓縮系數(shù)為 1.05 ~ 1.10；然后啟動輸液泵，用 1.5~2 倍工作流速使柱床穩(wěn)定。

6）按照 SOP 進行柱效和對稱性的測定，須達到預定標準。

3.2 柱效評價

裝好之后，色譜柱用3-5體積超純水清洗。100cm/h流速平衡并進行柱效測試。

離子交換層析柱的柱效測試方法

樣品： 2 M NaCl 溶液

上樣量： 1~5 % 柱體積

洗脫液： 0.5 M NaCl 溶液

線性流速： 100 cm/h

檢測： UV @ 280 nm ,2 M NaCl 上樣：電導檢測儀

3.3 清洗

裝好的色譜柱應使用至少使用5BV的去離子水清洗。

3.4 平衡

使用適當?shù)?-10倍柱體積緩沖液進行柱子的平衡，至流出液電導和PH不變（與平衡液一致），緩沖液如 Buffer A，如 20 mM PBS, pH7.0，具體的緩沖體系應根據(jù)目標蛋白的穩(wěn)定性和等電點、離子交換介質的種類進行篩選和優(yōu)化。

3.5上樣

固體樣品可用平衡液溶解配制；低濃度樣品溶液可用平衡液透析；高濃度樣品溶液可用平衡液稀釋。為了避免堵塞層析柱，樣品應經離心或膜過濾處理。進料量根據(jù)介質的載量和料液中目標蛋白的含量計算，上樣前確保樣品緩沖液應盡可能與平衡液一致。

3.6洗脫

上樣完畢后繼續(xù)用平衡緩沖液淋洗至基線穩(wěn)定，可以根據(jù)實際情況采取提高鹽濃度或改變流動相 pH 的方法依次洗脫吸附于層析介質上的樣品。

3.7再生

每次層析之后可用0.5-2 M NaCl 清洗層析柱，除去強結合于層析介質上的蛋白。

3.8 在位清洗

為了保持層析柱的性能，若有蛋白質或其他雜質在再生過程中未能有效去除，可執(zhí)行在位清洗步驟，在位清洗時，也可采用反向沖洗的方法，具體操作步驟如下：

（1）對于通過離子鍵結合過強的蛋白，可用3BV以上的2M NaCl 清洗，并用3BV以上的去離子水清洗；

（2）對沉淀蛋白、以疏水性結合的蛋白或脂蛋白，可用0.2~0.5 M NaOH 清洗（與層析介質接觸時間 1~2 h），并用5BV以上平衡液和3BV以上的去離子水清洗；

（3）對強疏水性結合的蛋白、脂蛋白和脂類物質，可用5BV以上的50%乙醇或 30%異丙醇清洗（與層析介質接觸時間0.5-1 h），并用 5 BV 以上的去離子水清洗。也可用含非離子表面活性劑的堿性或酸性溶液清洗，如0.1~0.5%的 Triton X-100 + 0.1 M乙酸清洗 1-2 h，并用5BV以上的50%乙醇沖洗去除去污劑，然后用5BV以上的純水沖洗（使用高濃度的有機溶劑時，為了避免產生氣泡，應采用逐步增加有機溶劑濃度的方法）。

3.9 應用案列

Seplife? LXPM SP5504M 應用（某客戶生產純化重組蛋白料液）