Pd oneS 填料與質粒 DNA 能高效特異性的結合，通過洗雜將 RNA、內(nèi)毒素和 HCP 等物質 去除，此外可有效分離開環(huán)質粒和超螺旋質粒，提高超螺旋質粒的濃度。質粒 DNA 經(jīng)過 Pd oneS 填料純化后，用異丙醇沉淀法進行沉淀，最后再使用 70%乙醇洗滌和沉淀，能夠獲得高質 量質粒 DNA，可直接用于酶切、PCR、測序、轉化等分子生物學實驗。Pd oneS 填料不僅可以 實現(xiàn)一步純化超螺旋質粒 DNA，同時還能夠有效去除內(nèi)毒素與其他雜質，操作簡便，可充分 提高實驗效率。

2.1 產(chǎn)品參數(shù)

2.2 純化效果 使用 Pd oneS 填料純化不同質粒效果如下圖所示。（注： P 為質粒 Plasmid 簡寫）

                               圖 1. Pd oneS 純化不同質粒的核酸電泳圖 

使用 50mL 重力柱進行純化可得到約 10~20mg 質粒 DNA（不同質粒 DNA 收率略有差異）， 純化效果良好證明 Pd oneS 填料具有良好的放大效應，純化效果如下圖所示：

                                         圖 2. Pd oneS放大純化質粒的核酸電泳圖

使用方法 

3.1 裝柱 按照重力柱的裝填流程操作。依次將下篩板，填料，上篩板裝入重力柱管中。

3.2 平衡 使用 2~5 倍柱床體積（CV）的平衡緩沖液平衡，平衡緩沖液：50mM Tris-HCl，0.25M NaCl，10mM EDTA，pH 7.5，務必使流出液的電導和 pH 同上樣緩沖液的電導和 pH完全一致。 

3.3 上樣 （1）樣品前處理：使用堿裂解法制備樣品，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。建議 5:1 重 懸菌泥（體積質量比），然后加入 0.2M NaOH，1% SDS 處理 4-10min，注意加入堿后要緩慢攪 拌。堿裂解的過程要注意堿的加入方式及接觸時間，避免質粒發(fā)生不可逆損傷而影響質粒 DNA 的回收率。最后使用 3M 醋酸鉀 pH5.5 中和裂解液，靜置 30min 后，將裂解液離心取上清或者 使用膜過濾澄清后上樣。 （2）上樣：上樣樣品一般使用現(xiàn)制現(xiàn)用，不建議使用久置樣品，影響純化效果。上樣結束 后使用 1~2CV 的平衡緩沖液進行淋洗。 

3.4 洗雜 使用洗雜緩沖液去除 RNA、內(nèi)毒素和 HCP等物質，為了盡量提高樣品純度，建議使用 3~5CV 清洗或更高。洗雜緩沖液： 50mM Tris-HCl，0.45 M NaCl，10mM EDTA，pH 7.5。 

3.5 洗脫 （1）使用洗脫緩沖液進行洗脫，建議用 1~2CV 的洗脫緩沖液洗脫，確保質粒 DNA 的洗脫 效率。洗脫緩沖液：50mM Tris-HCl，1.25M NaCl，10mM EDTA，15%的異丙醇，pH 8.5。 （2）樣品后處理：在洗脫液中加入終濃度大于 30%的異丙醇進行沉淀，4℃靜置 30min 后， ≥10000g 離心 20min，然后去上清（禁止晃動，減小損失），迅速加入 1/4 洗脫體積的 70%或 無水乙醇洗滌質粒 DNA 樣品，4℃靜置 30min 后，≥10000g 離心 30min，最后溫和的移去上清 （禁止晃動，避免固體顆粒移除，盡量減小損失），待離心管乙醇完全揮發(fā)后使用超純水或核 酸保藏 Buffer進行復溶，保藏備用。 第 3 頁 共 5 頁蘇州藍曉生物科技有限公司 第 4 頁 共 5 頁 

3.6 原位清洗（CIP） 質粒純化結束后，首先用超純水清洗重力柱 3CV，然后使用 0.5M NaOH 溶液對重力柱進行 原位清洗，使用 2CV 的0.5M NaOH溶液浸泡 15~30min，或者使用 5CV 的0.5M NaOH溶液動態(tài) 清洗。 

3.7 存儲 密封保存在4~30℃（保存溶液為 20%乙醇）干燥、通風、清潔處，不可冷凍；用過的重力 柱保存在 4~8℃, 20%乙醇溶液。

3.8 運輸 運輸中避免日曬、雨淋、重壓， 嚴禁與有毒、有害物品混運。 

4.注意事項

  （1）所有緩沖液使用前須進行滅菌或無菌過濾，避免污染。 

（2）裝填后的重力柱使用過程中請嚴格按照清洗流程清洗后保存，否則會影響后續(xù)使用效 果和使用壽命。 

（3）建議根據(jù)不同需求選擇合適大小的重力柱管。 

（4）樣品濃度不宜過高，重力條件下高濃度容易造成樣品損失。 

（5）如若對內(nèi)毒素有嚴格要求，請使用無熱原水配置所有 Buffer，所有設備進行無菌處理 后在潔凈間進行實驗。

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