南京Seplife? LXPM CM400M

基本信息

Seplife? LXPM CM400M層析介質(zhì)是以聚甲基丙烯酸酯為基質(zhì)，在表面進(jìn)行了親水性改性再鍵合了弱酸性離子交換基團(tuán)，具有親水性好、孔道均一、機(jī)械強(qiáng)度高、反壓低等特點。與傳統(tǒng)層析填料相比，表現(xiàn)出更優(yōu)異的分離性能，顯著的提高了下游純化工藝的生產(chǎn)效率……

產(chǎn)品描述
產(chǎn)品屬性參數(shù)
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Seplife? LXPM CM400M層析介質(zhì)是以聚甲基丙烯酸酯為基質(zhì)，在表面進(jìn)行了親水性改性再鍵合了弱酸性離子交換基團(tuán)，具有親水性好、孔道均一、機(jī)械強(qiáng)度高、反壓低等特點。與傳統(tǒng)層析填料相比，表現(xiàn)出更優(yōu)異的分離性能，顯著的提高了下游純化工藝的生產(chǎn)效率。除此之外，Seplife? LXPM CM400M層析介質(zhì)可替代昂貴的瓊脂糖離子交換樹脂進(jìn)行蛋白聚集體的初級純化，降低成本，創(chuàng)造出較好的經(jīng)濟(jì)效益，廣泛應(yīng)用于生物大分子（蛋白，抗源等）的純化和分離。

骨架	聚甲基丙烯酸甲酯
外觀	白色不透明球狀顆粒
功能基團(tuán)	-R- COOH
交換容量（mmol/mL）	0.18-0.22
平均粒徑（μm）	80
孔徑（?）	4000
載量（mg/ml,lysozyme）	≧75
壓力流速(cm/h)	120-300
pH	pH=1 or 14（≦100h），pH=2-13（長期）
耐壓（Mpa）	0.8
存儲	4～30℃ 的 20%乙醇
再生	0.5-2M NaCl溶液
清洗	0.1-0.5M NaOH溶液（或者50%乙醇）

使用方法

3.1 裝柱

勻漿濃度等于靜置膠體積除以除以勻漿后的總體積。采用0.5M NaCl勻漿可獲得最佳裝柱效果，其濃度為65%-70%。方法如下：

1)色譜柱的柱體積 V，V=Ac×L，Ac=π×r2。

Ac：色譜柱橫截面積；L:色譜柱高度；r：色譜柱半徑。

2) 攪動介質(zhì)形成勻漿液，量取所需質(zhì)量或體積。其為柱體積的1.2倍左右，防止收縮。

3）用 0.5 M NaCl 溶液置換20%乙醇，平衡過夜。

4）裝柱之前，用 0.5 M NaCl 溶液調(diào)整勻漿濃度為 50 ~ 70%；將勻漿一次性倒入層析柱，沉降平衡后標(biāo)注高度。

5）將分配器裝入，調(diào)節(jié)高度使得壓縮系數(shù)為 1.05 ~ 1.10；然后啟動輸液泵，用 1.5~2 倍工作流速使柱床穩(wěn)定（2 - 5柱體積）。

6）按照 SOP 進(jìn)行柱效和對稱性的測定，須達(dá)到預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)。

3.2 柱效評價

裝好之后，色譜柱用2 - 5 CV 0.5 M NaCl 溶液平衡，再用 2.0 M NaCl 以 100 cm/h 流速進(jìn)行柱效測試，具體測試參數(shù)詳見下表：

離子交換層析柱的柱效測試方法

樣品： 2 M NaCl 溶液

上樣量： 0.5-1 % 柱體積

洗脫液： 0.5 M NaCl 溶液

線性流速： 100 cm/h

檢測： UV @ 280 nm，電導(dǎo)檢測儀

3.3 清洗

裝好的色譜柱應(yīng)使用至少使用5 CV的去離子水清洗。

3.4 平衡

使用適當(dāng)?shù)?CV倍柱體積緩沖液進(jìn)行柱子的平衡，至流出液電導(dǎo)和PH不變（與平衡液一致），緩沖液如 Buffer A，如 20 mM PBS, pH7.0，具體的緩沖體系應(yīng)根據(jù)目標(biāo)蛋白的穩(wěn)定性和等電點、離子交換介質(zhì)的種類進(jìn)行篩選和優(yōu)化。

3.5上樣

固體樣品可用平衡液溶解配制；低濃度樣品溶液可用平衡液透析；高濃度樣品溶液可用平衡液稀釋。為了避免堵塞層析柱，樣品應(yīng)經(jīng)離心或膜過濾處理。進(jìn)料量根據(jù)介質(zhì)的載量和料液中目標(biāo)蛋白的含量計算，上樣前確保樣品緩沖液應(yīng)盡可能與平衡液一致。

3.6洗脫

上樣完畢后繼續(xù)用平衡緩沖液淋洗至基線穩(wěn)定，可以根據(jù)實際情況采取提高鹽濃度或改變流動相 pH 的方法依次洗脫吸附于層析介質(zhì)上的樣品。

3.7再生

每次層析之后可用0.5-2 M NaCl 清洗層析柱，除去強(qiáng)結(jié)合于層析介質(zhì)上的蛋白。

3.8 在位清洗

為了保持層析柱的性能，若有蛋白質(zhì)或其他雜質(zhì)在再生過程中未能有效去除，可執(zhí)行在位清洗步驟，在位清洗時，也可采用反向沖洗的方法，具體操作步驟如下：

（1）對于通過離子鍵結(jié)合過強(qiáng)的蛋白，可用3CV以上的2M NaCl 清洗，并用3CV以上的去離子水清洗；

（2）對沉淀蛋白、以疏水性結(jié)合的蛋白或脂蛋白，可用0.2~0.5 M NaOH 清洗（與層析介質(zhì)接觸時間 1~2 h），并用5CV以上平衡液和3CV以上的去離子水清洗；

（3）對強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂蛋白和脂類物質(zhì)，可用5CV以上的50%乙醇或 30%異丙醇清洗（與層析介質(zhì)接觸時間0.5-1 h），并用5 CV以上的去離子水清洗。也可用含非離子表面活性劑的堿性或酸性溶液清洗，如0.1~0.5%的 Triton X-100 + 0.1 M乙酸清洗 1-2 h，并用5CV以上的50%乙醇沖洗去除去污劑，然后用5CV以上的純水沖洗（使用高濃度的有機(jī)溶劑時，為了避免產(chǎn)生氣泡，應(yīng)采用逐步增加有機(jī)溶劑濃度的方法）。

4.存儲

暫時不使用的層析介質(zhì)需保存在 4～30℃ 的 20%乙醇中，已經(jīng)裝好的層析柱應(yīng)保存在含 20%乙醇的緩沖液(pH 7.0)；使用前請裝柱后將乙醇清洗干凈。

5.運輸

運輸中避免日曬、雨淋、重壓，嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運。

產(chǎn)品牌號	貨號	包裝規(guī)格
Seplife? LXPM CM400M	PM00225M2-1	25ml
	PM00225M2-2	100ml
	PM00225M2-3	500ml
	PM00225M2-4	1L
	PM00225M2-5	5L
	PM00225M2-6	10L