南京Seplife LX-MC-Dex1

基本信息

Seplife LX-MC-Dex1是藍(lán)曉科技自主研發(fā)的一種適用于細(xì)胞貼附生長(zhǎng)的微珠載體，它以Seplife G50為基質(zhì)，表面覆蓋帶正電荷的DEAE基團(tuán)。Seplife LX-MC-Dex1是當(dāng)前用途最廣的一種微載體，適應(yīng)培養(yǎng)的細(xì)胞類型60余種，主要用于生產(chǎn)疫苗、蛋白質(zhì)產(chǎn)品等。

產(chǎn)品描述
產(chǎn)品屬性參數(shù)
說明書
訂貨信息

產(chǎn)品牌號(hào)	Seplife LX-MC-Dex1
外觀	白色顆粒，無臭無味
浮力密度*（g/ml）	<1.045
顆粒大?。é蘭）	干粉：60-87μm占比 >70%；濕膠*：145-240
生理鹽水中	145-240
離子交換量（mmolCl-/g干粉）	1.4-1.6
溶脹*（ml/g干粉）	17-22
干燥失重	< 10%
微生物菌落（CFU/g）	< 100
重金屬含量（ug/g）	<5
有效培養(yǎng)面積*（cm2/g）	3500-5500
功能性測(cè)試，vero細(xì)胞，測(cè)試組與對(duì)照組斜率比值	>0.8
應(yīng)用	適合貼壁依賴型細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)，用于生產(chǎn)疫苗及蛋白等

* 生理鹽水中

使用方法

3.1微載體預(yù)處理

首先，干燥的微載體在無Ca2+ 和Mg 2+ 的磷酸緩沖液（PBS，pH=7.4）（每克微載體加50-100ml）中在室溫下浸泡膨脹至少3小時(shí)。然后，棄去上清液，用新配制的無Ca2+ 、Mg 2+ 的PBS（pH=7.4）（每克微載體加30-50ml）洗滌微載體數(shù)分鐘。接著，棄去PBS，換上新的無Ca2+ 、Mg2+ 的PBS（pH=7.4）（每克微載體加30-50ml）。之后，微載體溶液用高壓滅菌法滅菌（115℃，15min，15psi）。微載體LX-MC-dex1非常穩(wěn)定，可以反復(fù)（至少5次）長(zhǎng)時(shí)間（130°C，12h，27psi）進(jìn)行高壓滅菌而不影響其性能。滅菌結(jié)束后使用前，加入培養(yǎng)基潤(rùn)洗置換（20-50ml/g），之后加入10%血清放置過夜。

3.2微載體培養(yǎng)

準(zhǔn)備好消化好的細(xì)胞，連同之前準(zhǔn)備好的微載體一起加入方瓶或反應(yīng)器中（微載體加量1-5g/L），在一定條件下開始培養(yǎng)，4小時(shí)后觀察細(xì)胞貼附情況。如果細(xì)胞貼附良好，繼續(xù)跟蹤培養(yǎng)，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。

3.3微載體培養(yǎng)操作要點(diǎn)

（1）培養(yǎng)初期：保證培養(yǎng)基與微球體處于穩(wěn)定的pH與溫度水平，接種細(xì)胞（對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，而非穩(wěn)定期）至終體積1/3的培養(yǎng)液中，以增加細(xì)胞與微載體接觸的機(jī)會(huì)。常使用2-3g/L的微載體含量，更高的微載體濃度需要控制環(huán)境或經(jīng)常換液。

由于動(dòng)物細(xì)胞無細(xì)胞壁，對(duì)剪切力敏感，因而無法靠提高攪拌轉(zhuǎn)速來增加接觸概率。通常的操作方式是：在貼壁期采用低攪拌轉(zhuǎn)速，時(shí)攪時(shí)停；數(shù)小時(shí)后，待細(xì)胞附著于微載體表面時(shí)，維持設(shè)定的低轉(zhuǎn)速，進(jìn)入培養(yǎng)階段。微載體培養(yǎng)的攪拌非常慢，最大速度75r/min。

（2）貼壁階段（3-8d）后，緩慢加入培養(yǎng)液至工作體積，并且增加攪拌速度保證完全均質(zhì)混合。

（3）培養(yǎng)維持期：進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)（胞核計(jì)數(shù)）、葡萄糖測(cè)定及細(xì)胞形態(tài)鏡檢。隨著細(xì)胞增殖，微球變得越來越重，需增加攪拌速率。經(jīng)過3d左右，培養(yǎng)液開始呈酸性，需換液。具體方法：停止攪拌，讓微珠沉淀5min，棄掉適宜體積的培養(yǎng)液，緩慢加入新鮮培養(yǎng)液（37℃），重新開始攪拌。

（4）收獲細(xì)胞：首先，排干培養(yǎng)液，至少用緩沖液漂洗1遍；然后，加入相應(yīng)的酶，快速攪拌（75-125r/min）20-30min；最后，解離收集細(xì)胞及其產(chǎn)品。

（5）微載體培養(yǎng)的放大：可以通過增加微載體的含量或培養(yǎng)體積進(jìn)行放大。使用異倍體或原代細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)疫苗、干擾素，已被放大至4000L以上。

存儲(chǔ)

貯存于4~30℃、干燥、通風(fēng)、清潔處。

運(yùn)輸

運(yùn)輸中避免日曬、雨淋、重壓，嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn)。

注意事項(xiàng)

本產(chǎn)品避免與氧化劑接觸。