Seplife? LXPM SP 5504S層析介質(zhì)是以聚丙烯酸酯為基質(zhì),在表面進(jìn)行了親水性改性再鍵合了強(qiáng)酸性離子交換基團(tuán),具有分辨率高、載量高、化學(xué)穩(wěn)定性好、機(jī)械強(qiáng)度大、非特異性吸附小等特點(diǎn),具有卓越的生物相容性和柱床穩(wěn)定性,特別適合大規(guī)模制備的應(yīng)用,顯著提高了下游純化工藝的生產(chǎn)效率,可以降低成本,創(chuàng)造出較好的經(jīng)濟(jì)效益,廣泛應(yīng)用于抗體、蛋白質(zhì)、多肽、核酸(寡核苷酸)、病毒,胰島素等生物分子的捕獲、中度純化、精細(xì)純化。
骨架 | 聚甲基丙烯酸甲酯 |
外觀 | 白色不透明球狀顆粒 |
功能基團(tuán) | -O-R-O-(CH2)3-SO3- |
交換容量(mmol/mL) | 0.09-0.13 |
D50v粒度(μm) | 50 |
孔徑(?) | 1000 |
動態(tài)載量(mg/ml,Lysozyme) | ≧115 |
pH范圍 | 2-13 |
最大耐壓(MPa) | 0.8 |
工作溫度(℃) | 4-30 |
存儲 防腐劑 | 20%乙醇溶液,150mol/l NaCl |
再生 | 0.5-2M NaCl溶液 |
清洗 | 0.1-0.5M NaOH溶液(或者50%乙醇) |
穩(wěn)定性 | 所有常用緩沖液,1M醋酸,1M NaOH,1M鹽酸,100%乙醇、IPA等常用有機(jī)溶劑;避免接觸強(qiáng)氧化劑 |
使用方法
3.1 裝柱
勻漿濃度等于靜置膠體積除以除以勻漿后的總體積。采用0.5M NaCl勻漿可獲得最佳裝柱效果,其濃度為60%-70%。方法如下:
1)色譜柱的柱體積 V,V=Ac×L,Ac=π×r2。
Ac:色譜柱橫截面積;L:色譜柱高度;r:色譜柱半徑。
2) 攪動介質(zhì)形成勻漿液,量取所需質(zhì)量或體積。其為柱體積的1.2倍左右,防止收縮。
3)用 0.5 M NaCl 溶液置換20%乙醇,平衡過夜。
4)裝柱之前,用 0.5 M NaCl 溶液調(diào)整勻漿濃度為 65 ~ 70%;將勻漿一次性倒入層析柱,沉降平衡后標(biāo)注高度。
5)將分配器裝入,調(diào)節(jié)高度使得壓縮系數(shù)為 1.05 ~ 1.10;然后啟動輸液泵,用 1.5~2 倍工作流速使柱床穩(wěn)定。
6)按照 SOP 進(jìn)行柱效和對稱性的測定,須達(dá)到預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)。
3.2 柱效評價
裝好之后,色譜柱用3-5體積超純水清洗。100cm/h流速平衡并進(jìn)行柱效測試。
離子交換層析柱的柱效測試方法
樣品: 2 M NaCl 溶液
上樣量: 1~5 % 柱體積
洗脫液: 0.5 M NaCl 溶液
線性流速: 100 cm/h
檢測: UV @ 280 nm ,2 M NaCl 上樣:電導(dǎo)檢測儀
3.3 清洗
裝好的色譜柱應(yīng)使用至少使用5BV的去離子水清洗。
3.4 平衡
使用適當(dāng)?shù)?-10倍柱體積緩沖液進(jìn)行柱子的平衡,至流出液電導(dǎo)和pH不變(與平衡液一致),緩沖液 如 Buffer A,如 20 mM PBS, pH7.0,具體的緩沖體系應(yīng)根據(jù)目標(biāo)蛋白的穩(wěn)定性和等電點(diǎn)、離子交換介質(zhì)的種類進(jìn)行篩選和優(yōu)化。
3.5上樣
固體樣品可用平衡液溶解配制;低濃度樣品溶液可用平衡液透析;高濃度樣品溶液可用 平衡液稀釋。為了避免堵塞層析柱,樣品應(yīng)經(jīng)離心或膜過濾處理。進(jìn)料量根據(jù)介質(zhì)的載量和料液中目標(biāo)蛋白的含量計(jì)算,上樣前確保樣品緩沖液應(yīng)盡可能與平衡液一致。
3.6洗脫
上樣完畢后繼續(xù)用平衡緩沖液淋洗至基線穩(wěn)定,可以根據(jù)實(shí)際情況采取提高鹽濃度或改變流動相 pH 的方法依次洗脫吸附于層析介質(zhì)上的樣品。
3.7再生
每次層析之后可用0.5-2 M NaCl 清洗層析柱,除去強(qiáng)結(jié)合于層析介質(zhì)上的蛋白。
3.8 在位清洗
為了保持層析柱的性能,若有蛋白質(zhì)或其他雜質(zhì)在再生過程中未能有效去除,可執(zhí)行在 位清洗步驟,在位清洗時,也可采用反向沖洗的方法,具體操作步驟如下:
(1)對于通過離子鍵結(jié)合過強(qiáng)的蛋白,可用3BV以上的2M NaCl 清洗,并用3BV以上的去離子水清洗;
(2)對沉淀蛋白、以疏水性結(jié)合的蛋白或脂蛋白,可用0.2~0.5 M NaOH 清洗(與層析介質(zhì)接觸時間 1~2 h),并用5BV以上平衡液和3BV以上的去離子水清洗;
(3)對強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂蛋白和脂類物質(zhì),可用5BV以上的50%乙醇或 30%異丙醇 清洗(與層析介質(zhì)接觸時間0.5-1 h),并用 5 BV 以上的去離子水清洗。也可用含非離子表面活性劑的堿性或酸性溶液清洗,如0.1~0.5%的 Triton X-100 + 0.1 M乙酸清洗 1-2 h,并用5BV以上的50%乙醇沖洗去除去污劑,然后用5BV以上的純水沖洗(使用高濃度的有機(jī)溶劑時,為了避免產(chǎn)生氣泡,應(yīng)采用逐步增加有機(jī)溶劑濃度的方法)。
3.9 應(yīng)用案例
(1)填料:5ml預(yù)裝柱,Seplife? LXPM SP5504S
(2)樣品:某豬圓環(huán)發(fā)酵液,上樣量:5ml
(3)平衡緩沖液A:20mmol/L PB,PH7.0
(4)洗脫緩沖液:20mmol/L PB+1mol/L Nacl,PH7.0
(5)洗柱溶液:0.5M NaOH
圖1.Seplife? LXPM SP5504S純化蛋白色譜圖
備注:藍(lán)色曲線:Seplife? LXPM SP5504S
紫色曲線:某外樣
4.存儲
暫時不使用的層析介質(zhì)需保存在 4~30℃ 的 20%乙醇中,已經(jīng)裝好的層析柱應(yīng)保存在含 20%乙醇的緩沖液(pH 7.0);使用前請裝柱后將乙醇清洗干凈。
5.運(yùn)輸
運(yùn)輸中避免日曬、雨淋、重壓,嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn)。
產(chǎn)品牌號 | 貨號 | 包裝規(guī)格 |
Seplife? LXPM SP5504S | PM50124S1-1 | 25ml |
PM50124S1-2 | 100ml | |
PM50124S1-3 | 500ml | |
PM50124S1-4 | 1L | |
PM50124S1-5 | 5L | |
PM50124S1-6 | 10L |
生產(chǎn)日期:見標(biāo)簽
使用期限:在適當(dāng)?shù)馁A藏條件下可貯藏5年
注冊人名稱/生產(chǎn)企業(yè):西安藍(lán)曉科技新材料股份有限公司
注冊人住址/生產(chǎn)地址:西安市高新開發(fā)區(qū)錦業(yè)路135號藍(lán)曉科技園
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