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          南昌Seplife? LXPM Ni 5504 NTA

          基本信息

          Seplife? LXPM Ni 5504 NTA層析介質(zhì)是以聚丙烯酸酯為基質(zhì),在表面進行了親水性改性再偶聯(lián)螯合基團制成,具有親水性好、高載量、分辨率高、非特性吸附小,物理化學(xué)穩(wěn)定等特點。Seplife? LXPM Ni 5504 NTA廣泛應(yīng)用于分離純化能被金屬離子吸附的多肽、蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白及帶His 標簽的重組蛋白。
          • 產(chǎn)品描述
          • 產(chǎn)品屬性參數(shù)
          • 說明書
          • 訂貨信息

          Seplife? LXPM Ni 5504 NTA層析介質(zhì)是以聚丙烯酸酯為基質(zhì),在表面進行了親水性改性再偶聯(lián)螯合基團制成,具有親水性好、高載量、分辨率高、非特性吸附小,物理化學(xué)穩(wěn)定等特點。Seplife? LXPM Ni 5504 NTA廣泛應(yīng)用于分離純化能被金屬離子吸附的多肽、蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白及帶His 標簽的重組蛋白。

          骨架

          聚甲基丙烯酸甲酯

          外觀

          淡藍色不透明球狀顆粒

          功能基團

          Ni2+

          D50v粒度(μm)

          80

          孔徑(?)

          1000

          載量(His蛋白,mg/ml)

          ≧20

          推薦線性流速(cm/h)

          100-800

          最大耐壓(MPa)

          0.8

          pH穩(wěn)定范圍

          2-12

          存儲,防腐劑

          20%乙醇溶液,150mol/l NaCl

          穩(wěn)定性

          在常用水相溶液中穩(wěn)定:0.1M氫氧化鈉、0.1M鹽酸;8M尿素、6M鹽酸胍(24h)、30%異丙醇、2%SDS、5mM DTT(24h)、70%乙醇(脫鎳的條件下)


          使用方法

          3.1 裝柱

          勻漿濃度等于靜置膠體積除以除以勻漿后的總體積。采用0.5M NaCl勻漿可獲得最佳裝柱效果,其濃度為60%-70%。方法如下:

          1)色譜柱的柱體積 V,V=Ac×L,Ac=π×r2。

          Ac:色譜柱橫截面積;L:色譜柱高度;r:色譜柱半徑。

          2) 攪動介質(zhì)形成勻漿液,量取所需質(zhì)量或體積。其為柱體積的1.2倍左右,防止收縮。

          3)用 0.5 M NaCl 溶液置換20%乙醇,平衡過夜。

          4)裝柱之前,用 0.5 M NaCl 溶液調(diào)整勻漿濃度為 65 ~ 70%;將勻漿一次性倒入層析柱,沉降平衡后標注高度。

          5)將分配器裝入,調(diào)節(jié)高度使得壓縮系數(shù)為 1.05 ~ 1.10;然后啟動輸液泵,用 1.5~2 倍工作流速使柱床穩(wěn)定。

          6)按照 SOP 進行柱效和對稱性的測定,須達到預(yù)定標準。

          3.2 柱效評價 

          裝好之后,色譜柱用3-5體積超純水清洗。100cm/h流速平衡并進行柱效測試。

          離子交換層析柱的柱效測試方法

          樣品:      2 M NaCl 溶液

          上樣量:    1~5 % 柱體積

          洗脫液:    0.5 M NaCl 溶液

          線性流速:  100 cm/h

          檢測:      UV @ 280 nm,2 M NaCl 上樣:電導(dǎo)檢測儀

          3.3 清洗

          裝好的色譜柱應(yīng)使用至少使用5BV的去離子水清洗。

          3.4 平衡

          使用適當(dāng)?shù)?-10倍柱體積緩沖液進行柱子的平衡,至流出液電導(dǎo)和PH不變(與平衡液一致),具體的緩沖體系應(yīng)根據(jù)目標蛋白特性及穩(wěn)定性進行篩選和優(yōu)化。

          3.5上樣 

          固體樣品可用平衡液溶解配制;低濃度樣品溶液可用平衡液透析;高濃度樣品溶液可用平衡液稀釋。為了避免堵塞層析柱,樣品應(yīng)經(jīng)離心或膜過濾處理。進料量根據(jù)介質(zhì)的載量和料液中目標蛋白的含量計算,上樣前確保樣品緩沖液應(yīng)盡可能與平衡液一致。此外,還需注意以下事項:

          (1)樣品一般溶解于pH6~8的初始緩沖液中,提高上樣緩沖液的pH值可以增大載量。

          (2)緩沖液中不能含有EDTA和檸檬酸鹽,同時最好避免巰基乙醇、DTT等還原劑。

          (3)常用緩沖液有10~100mmol/L磷酸鈉緩沖液、20~200mmol/L Tris-HCl緩沖液等。

          (4)緩沖液中一般要加入0.15~0.5mol/L的NaCl以消除離子交換作用。

          3.6洗脫 

          上樣完畢后繼續(xù)用平衡緩沖液淋洗至基線穩(wěn)定,可以根據(jù)實際情況采取以下幾種方法洗脫吸附于層析介質(zhì)上的樣品:

          (1)降低pH洗脫:大多數(shù)蛋白在pH 4~6會被洗脫下來(也可以在pH 3~4),緩沖液可以是醋酸鈉、檸檬酸和磷酸鹽緩沖體系。

          (2)競爭性洗脫:線性增加或一步增加同金屬離子有親和力的競爭物質(zhì)的濃度(如0~0.5mol/L咪唑、0~50 mmol/L組氨酸、0~2mol/L NH4Cl)。

          (3)螯合劑洗脫:EDTA、EGTA 等螯合劑可同金屬離子產(chǎn)生作用力會使蛋白被洗脫下來。但是此法不能分離不同的蛋白,會影響蛋白的吸附,導(dǎo)致融合蛋白無法掛柱。

          備注:(1)初次使用時,如不確定洗脫需要的咪唑濃度,推薦在初始緩沖液中分別加入10mmol/L、20mmol/L、50mmol/L、100mmol/L、200mmol/L、500mmol/L咪唑,濃度從低到高分別洗脫和收集重組蛋白,之后通過SDS-PAGE電泳等方法鑒定洗脫結(jié)果。

          (2)咪唑為堿性,相應(yīng)緩沖液配制后需要用HCl調(diào)節(jié)pH值。

          (3)降低pH洗脫和螯合劑洗脫會使金屬離子脫落,下次使用前需重新螯和金屬離子。

          (4)有條件的可以進行咪唑梯度線性洗脫以確定較佳的洗脫條件。

          上述洗脫方法,均須在緩沖液中加入150~500mmol/L的NaCl以消除離子交換作用。

          3.7再生 

          (1)多次使用后或需要更換螯合的金屬離子時,必須將凝膠脫鎳再生。脫鎳方法:首先用5~10個柱床體積的蒸餾水淋洗柱子,然后用5~10個柱床體積的100mmol/L EDTA淋洗柱子,最后用2~3個柱床體積的0.5mol/L NaCl洗掉殘留的EDTA。

          (2)多次使用的柱子脫鎳后一般需要清洗。清洗方法:用0.1~1.0 mol/L NaOH反向清洗柱子,50 cm/h保持1~2 h,不僅可以去除結(jié)合強的雜質(zhì),也可以去除熱源。

          (3)清洗后需要重新螯合金屬離子。螯合方法:首先用2~5個柱床體積的蒸餾水充分平衡脫鎳后的柱子,然后用0.1~0.3mol/L金屬鹽溶液過柱5~10個柱床體積以螯合金屬離子,最后用5~10個柱床體積的蒸餾水淋洗以去除未螯合的金屬離子。

          3.8 在位清洗 

          為了保持層析柱的性能,若有蛋白質(zhì)或其他雜質(zhì)在再生過程中未能有效去除,可執(zhí)行在位清洗步驟,具體操作步驟如下:

          (1)去除因離子交換作用吸附的蛋白:用2mol/L NaCl溶液反向清洗2~3個柱床體積。

          (2)去除強疏水性蛋白和脂質(zhì)等:用70%乙醇或者30%異丙醇反向清洗4個柱床體積。

          (3)除去沉淀蛋白、疏水性蛋白:參照凝膠再生步驟。

          3.9 應(yīng)用案列

          (1)樣品:protein A重組蛋白樣品,C=2mg/ml。

          (2)填料:1ml預(yù)裝柱,7*25mm

          (3)上樣量20ml;

          (4)流動相A1:1*PBS+15mM咪唑,PH7.3

          流動相B:1*PBS+1mol/L 咪唑,PH7.3

          圖1.Seplife? LXPM Ni 5504 NTA純化蛋白色譜圖

          備注:紅色曲線:Seplife? LXPM Ni 5504 NTA

          綠色曲線:某外樣

          4.存儲

          暫時不使用的層析介質(zhì)需保存在 4~30 ℃ 的 20%乙醇中,已經(jīng)裝好的層析柱應(yīng)保存在含 20%乙醇的緩沖液(pH 7.0);使用前請裝柱后將乙醇清洗干凈。

          5.運輸

          運輸中避免日曬、雨淋、重壓,嚴禁與有毒、有害物品混運。


          產(chǎn)品牌號

          貨號

          包裝規(guī)格

          Seplife? LXPM Ni5504 NTA 

          PM521124M1-1

          25ml

          PM521124M1-2

          100ml

          PM521124M1-3

          500ml

          PM521124M1-4

          1L

          PM521124M1-5

          5L

          PM521124M1-6

          10L

          生產(chǎn)日期:見標簽

          使用期限:在適當(dāng)?shù)馁A藏條件下可貯藏5年

          注冊人名稱/生產(chǎn)企業(yè):西安藍曉科技新材料股份有限公司

          注冊人住址/生產(chǎn)地址:西安市高新開發(fā)區(qū)錦業(yè)路135號藍曉科技園

          售后服務(wù)單位:西安藍曉科技新材料股份有限公司

          郵政編碼:710076

          聯(lián)系電話:86-29-8110 4050

          傳真:029-8669 1600-8254

          官方網(wǎng)站:www.sunresin.com

          注冊人名稱/銷售企業(yè):蘇州藍曉生物科技有限公司

          注冊人地址/銷售地址:蘇州市區(qū)工業(yè)園區(qū)裕新路108號5樓525室

          聯(lián)系電話:0512-65160522


          標簽

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