Seplife? LXPM DEAE400M層析介質(zhì)是以聚甲基丙烯酸酯為基質(zhì),在表面進(jìn)行了親水性改性再鍵合了弱堿性離子交換基團(tuán),具有親水性好、孔道均一、機(jī)械強(qiáng)度高、反壓低等特點(diǎn)。與傳統(tǒng)層析填料相比,表現(xiàn)出更優(yōu)異的分離性能,顯著的提高了下游純化工藝的生產(chǎn)效率。除此之外,Seplife? LXPM DEAE400M層析介質(zhì)可替代昂貴的瓊脂糖離子交換樹(shù)脂進(jìn)行蛋白聚集體的初級(jí)純化,降低成本,創(chuàng)造出較好的經(jīng)濟(jì)效益,廣泛應(yīng)用于生物大分子(蛋白,抗源等)的純化和分離。
骨架 | 聚甲基丙烯酸甲酯 |
外觀(guān) | 白色不透明球狀顆粒 |
功能基團(tuán) | -O-(CH2)2-HN+-(C2H5)2 |
交換容量(mmol/mL) | 0.18-0.22 |
平均粒徑(μm) | 80 |
孔徑(?) | 4000 |
載量(mg/ml,lysozyme) | ≧80 |
壓力流速(cm/h) | 120-300 |
pH | pH=1 or 14(≦100h),pH=2-13(長(zhǎng)期) |
耐壓(Mpa) | 0.8 |
存儲(chǔ) | 4~30℃ 的 20%乙醇 |
再生 | 0.5-2M NaCl溶液 |
清洗 | 0.1-0.5M NaOH溶液(或者50%乙醇) |
使用方法
3.1 裝柱
勻漿濃度等于靜置膠體積除以除以勻漿后的總體積。采用0.5M NaCl勻漿可獲得最佳裝柱效果,其濃度為65%-70%。方法如下:
1)色譜柱的柱體積 V,V=Ac×L,Ac=π×r2。
Ac:色譜柱橫截面積;L:色譜柱高度;r:色譜柱半徑。
2) 攪動(dòng)介質(zhì)形成勻漿液,量取所需質(zhì)量或體積。其為柱體積的1.2倍左右,防止收縮。
3)用 0.5 M NaCl 溶液置換20%乙醇,平衡過(guò)夜。
4)裝柱之前,用 0.5 M NaCl 溶液調(diào)整勻漿濃度為 50 ~ 70%;將勻漿一次性倒入層析柱,沉降平衡后標(biāo)注高度。
5)將分配器裝入,調(diào)節(jié)高度使得壓縮系數(shù)為 1.05 ~ 1.10;然后啟動(dòng)輸液泵,用 1.5~2 倍工作流速使柱床穩(wěn)定(2 - 5柱體積)。
6)按照 SOP 進(jìn)行柱效和對(duì)稱(chēng)性的測(cè)定,須達(dá)到預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)。
3.2 柱效評(píng)價(jià)
裝好之后,色譜柱用2 - 5 CV 0.5 M NaCl 溶液平衡,再用 2.0 M NaCl 以 100 cm/h 流速進(jìn)行柱效測(cè)試,具體測(cè)試參數(shù)詳見(jiàn)下表:
離子交換層析柱的柱效測(cè)試方法
樣品: 2 M NaCl 溶液
上樣量: 0.5-1 % 柱體積
洗脫液: 0.5 M NaCl 溶液
線(xiàn)性流速: 100 cm/h
檢測(cè): UV @ 280 nm,電導(dǎo)檢測(cè)儀
3.3 清洗
裝好的色譜柱應(yīng)使用至少使用5 CV的去離子水清洗。
3.4 平衡
使用適當(dāng)?shù)?CV倍柱體積緩沖液進(jìn)行柱子的平衡,至流出液電導(dǎo)和PH不變(與平衡液一致),緩沖液 如 Buffer A,如 20 mM PBS, pH7.0,具體的緩沖體系應(yīng)根據(jù)目標(biāo)蛋白的穩(wěn)定性和等電點(diǎn)、離子交換介質(zhì)的種類(lèi)進(jìn)行篩選和優(yōu)化。
3.5上樣
固體樣品可用平衡液溶解配制;低濃度樣品溶液可用平衡液透析;高濃度樣品溶液可用平衡液稀釋。為了避免堵塞層析柱,樣品應(yīng)經(jīng)離心或膜過(guò)濾處理。進(jìn)料量根據(jù)介質(zhì)的載量和料液中目標(biāo)蛋白的含量計(jì)算,上樣前確保樣品緩沖液應(yīng)盡可能與平衡液一致。
3.6洗脫
上樣完畢后繼續(xù)用平衡緩沖液淋洗至基線(xiàn)穩(wěn)定,可以根據(jù)實(shí)際情況采取提高鹽濃度或改變流動(dòng)相 pH 的方法依次洗脫吸附于層析介質(zhì)上的樣品。
3.7再生
每次層析之后可用0.5-2 M NaCl 清洗層析柱,除去強(qiáng)結(jié)合于層析介質(zhì)上的蛋白。
3.8 在位清洗
為了保持層析柱的性能,若有蛋白質(zhì)或其他雜質(zhì)在再生過(guò)程中未能有效去除,可執(zhí)行在位清洗步驟,在位清洗時(shí),也可采用反向沖洗的方法,具體操作步驟如下:
(1)對(duì)于通過(guò)離子鍵結(jié)合過(guò)強(qiáng)的蛋白,可用3CV以上的2M NaCl 清洗,并用3CV以上的去離子水清洗;
(2)對(duì)沉淀蛋白、以疏水性結(jié)合的蛋白或脂蛋白,可用0.2~0.5 M NaOH 清洗(與層析介質(zhì)接觸時(shí)間 1~2 h),并用5CV以上平衡液和3CV以上的去離子水清洗;
(3)對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂蛋白和脂類(lèi)物質(zhì),可用5CV以上的50%乙醇或 30%異丙醇清洗(與層析介質(zhì)接觸時(shí)間0.5-1 h),并用5 CV以上的去離子水清洗。也可用含非離子表面活性劑的堿性或酸性溶液清洗,如0.1~0.5%的 Triton X-100 + 0.1 M乙酸清洗 1-2 h,并用5CV以上的50%乙醇沖洗去除去污劑,然后用5CV以上的純水沖洗(使用高濃度的有機(jī)溶劑時(shí),為了避免產(chǎn)生氣泡,應(yīng)采用逐步增加有機(jī)溶劑濃度的方法)。
4.存儲(chǔ)
暫時(shí)不使用的層析介質(zhì)需保存在 4~30℃ 的 20%乙醇中,已經(jīng)裝好的層析柱應(yīng)保存在含 20%乙醇的緩沖液(pH 7.0);使用前請(qǐng)裝柱后將乙醇清洗干凈。
5.運(yùn)輸
運(yùn)輸中避免日曬、雨淋、重壓,嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn)。
產(chǎn)品牌號(hào) | 貨號(hào) | 包裝規(guī)格 |
Seplife? LXPM DEAE400M | PM00425M2-1 | 25ml |
PM00425M2-2 | 100ml | |
PM00425M2-3 | 500ml | |
PM00425M2-4 | 1L | |
PM00425M2-5 | 5L | |
PM00425M2-6 | 10L |
生產(chǎn)日期:見(jiàn)標(biāo)簽
使用期限:在適當(dāng)?shù)馁A藏條件下可貯藏5年
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