Pd oneS 填料與質(zhì)粒 DNA 能高效特異性的結(jié)合,通過洗雜將 RNA、內(nèi)毒素和 HCP 等物質(zhì) 去除,此外可有效分離開環(huán)質(zhì)粒和超螺旋質(zhì)粒,提高超螺旋質(zhì)粒的濃度。質(zhì)粒 DNA 經(jīng)過 Pd oneS 填料純化后,用異丙醇沉淀法進(jìn)行沉淀,最后再使用 70%乙醇洗滌和沉淀,能夠獲得高質(zhì) 量質(zhì)粒 DNA,可直接用于酶切、PCR、測(cè)序、轉(zhuǎn)化等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。Pd oneS 填料不僅可以 實(shí)現(xiàn)一步純化超螺旋質(zhì)粒 DNA,同時(shí)還能夠有效去除內(nèi)毒素與其他雜質(zhì),操作簡(jiǎn)便,可充分 提高實(shí)驗(yàn)效率。
2.1 產(chǎn)品參數(shù)
產(chǎn)品牌號(hào) | Pd oneS |
外觀 | 白色球狀,無(wú)臭無(wú)味 |
種類 | 離子交換填料 |
基質(zhì) | 聚苯乙烯微球 |
配基 | 季胺 |
粒徑 d50v(μm) | 50~100 |
pH 穩(wěn)定性 | 4~12(長(zhǎng)期),3~14(短期,在位清洗[CIP]) |
化學(xué)穩(wěn)定性 | 在以下液體中穩(wěn)定:所有常用的緩沖液;1 M 氫氧化鈉; 8 M 尿素;8mol/L 鹽酸胍;75% 乙醇;30%異丙醇 |
重力載量(mg /ml) | >0.25mg /ml (高拷貝質(zhì)粒,柱高 2cm) |
工作溫度 | 4~30℃ |
耐熱性 | 40℃,水中 2 h |
重力流速 | >4.00 mL/min, 柱高 2cm(柱高對(duì)重力流速影響較大) |
2.2 純化效果 使用 Pd oneS 填料純化不同質(zhì)粒效果如下圖所示。(注: P 為質(zhì)粒 Plasmid 簡(jiǎn)寫)
圖 1. Pd oneS 純化不同質(zhì)粒的核酸電泳圖
使用 50mL 重力柱進(jìn)行純化可得到約 10~20mg 質(zhì)粒 DNA(不同質(zhì)粒 DNA 收率略有差異), 純化效果良好證明 Pd oneS 填料具有良好的放大效應(yīng),純化效果如下圖所示:
圖 2. Pd oneS放大純化質(zhì)粒的核酸電泳圖
使用方法
3.1 裝柱 按照重力柱的裝填流程操作。依次將下篩板,填料,上篩板裝入重力柱管中。
3.2 平衡 使用 2~5 倍柱床體積(CV)的平衡緩沖液平衡,平衡緩沖液:50mM Tris-HCl,0.25M NaCl,10mM EDTA,pH 7.5,務(wù)必使流出液的電導(dǎo)和 pH 同上樣緩沖液的電導(dǎo)和 pH完全一致。
3.3 上樣 (1)樣品前處理:使用堿裂解法制備樣品,渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。建議 5:1 重 懸菌泥(體積質(zhì)量比),然后加入 0.2M NaOH,1% SDS 處理 4-10min,注意加入堿后要緩慢攪 拌。堿裂解的過程要注意堿的加入方式及接觸時(shí)間,避免質(zhì)粒發(fā)生不可逆損傷而影響質(zhì)粒 DNA 的回收率。最后使用 3M 醋酸鉀 pH5.5 中和裂解液,靜置 30min 后,將裂解液離心取上清或者 使用膜過濾澄清后上樣。 (2)上樣:上樣樣品一般使用現(xiàn)制現(xiàn)用,不建議使用久置樣品,影響純化效果。上樣結(jié)束 后使用 1~2CV 的平衡緩沖液進(jìn)行淋洗。
3.4 洗雜 使用洗雜緩沖液去除 RNA、內(nèi)毒素和 HCP等物質(zhì),為了盡量提高樣品純度,建議使用 3~5CV 清洗或更高。洗雜緩沖液: 50mM Tris-HCl,0.45 M NaCl,10mM EDTA,pH 7.5。
3.5 洗脫 (1)使用洗脫緩沖液進(jìn)行洗脫,建議用 1~2CV 的洗脫緩沖液洗脫,確保質(zhì)粒 DNA 的洗脫 效率。洗脫緩沖液:50mM Tris-HCl,1.25M NaCl,10mM EDTA,15%的異丙醇,pH 8.5。 (2)樣品后處理:在洗脫液中加入終濃度大于 30%的異丙醇進(jìn)行沉淀,4℃靜置 30min 后, ≥10000g 離心 20min,然后去上清(禁止晃動(dòng),減小損失),迅速加入 1/4 洗脫體積的 70%或 無(wú)水乙醇洗滌質(zhì)粒 DNA 樣品,4℃靜置 30min 后,≥10000g 離心 30min,最后溫和的移去上清 (禁止晃動(dòng),避免固體顆粒移除,盡量減小損失),待離心管乙醇完全揮發(fā)后使用超純水或核 酸保藏 Buffer進(jìn)行復(fù)溶,保藏備用。 第 3 頁(yè) 共 5 頁(yè)蘇州藍(lán)曉生物科技有限公司 第 4 頁(yè) 共 5 頁(yè)
3.6 原位清洗(CIP) 質(zhì)粒純化結(jié)束后,首先用超純水清洗重力柱 3CV,然后使用 0.5M NaOH 溶液對(duì)重力柱進(jìn)行 原位清洗,使用 2CV 的0.5M NaOH溶液浸泡 15~30min,或者使用 5CV 的0.5M NaOH溶液動(dòng)態(tài) 清洗。
3.7 存儲(chǔ) 密封保存在4~30℃(保存溶液為 20%乙醇)干燥、通風(fēng)、清潔處,不可冷凍;用過的重力 柱保存在 4~8℃, 20%乙醇溶液。
3.8 運(yùn)輸 運(yùn)輸中避免日曬、雨淋、重壓, 嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn)。
4.注意事項(xiàng)
(1)所有緩沖液使用前須進(jìn)行滅菌或無(wú)菌過濾,避免污染。
(2)裝填后的重力柱使用過程中請(qǐng)嚴(yán)格按照清洗流程清洗后保存,否則會(huì)影響后續(xù)使用效 果和使用壽命。
(3)建議根據(jù)不同需求選擇合適大小的重力柱管。
(4)樣品濃度不宜過高,重力條件下高濃度容易造成樣品損失。
(5)如若對(duì)內(nèi)毒素有嚴(yán)格要求,請(qǐng)使用無(wú)熱原水配置所有 Buffer,所有設(shè)備進(jìn)行無(wú)菌處理 后在潔凈間進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
訂貨信息
產(chǎn)品牌號(hào) | 貨號(hào) | 包裝規(guī)格 |
Pd oneS | PS10335M2-2 | 25ml |
PS10335M2-3 | 100ml | |
PS10335M2-4 | 500ml | |
PS10335M2-5 | 1L | |
PS10335M2-6 | 5L | |
PS10335M2-7 | 10L |
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