SP Seplife FF層析介質(zhì)是藍(lán)曉科技自主研發(fā)的一種新型高度交聯(lián)的瓊脂糖層析介質(zhì),是將磺酸基丙基鍵合在瓊脂糖凝膠過濾層析介質(zhì)上形成的一種強(qiáng)陽離子交換層析介質(zhì),具有高流速、低反壓、高動(dòng)態(tài)載量、良好的化學(xué)穩(wěn)定性和機(jī)械性能,非特異性吸附低,回收率高,方便進(jìn)行規(guī)模放大,可縮短生產(chǎn)時(shí)間,提高生產(chǎn)效率。廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的離子交換分離。
產(chǎn)品牌號(hào) | SP Seplife FF |
外觀 | 白色球狀凝膠,無臭無味 |
種類 | 強(qiáng)陽離子交換填料 |
基質(zhì) | Seplife 6FF |
配基 | 磺酸基丙基 |
粒徑(μm) | 50~160 |
pH穩(wěn)定性 | 4~13(長期),3~14(短期,在位清洗[CIP]) |
化學(xué)穩(wěn)定性 | 在以下液體中穩(wěn)定:所有常用的水相緩沖液;1mol/L 氫氧化鈉;8mol/L 尿素;8mol/L 鹽酸胍;70% 乙醇 |
吸附量(mg /ml) | >55mg/ml (溶菌酶) |
離子交換量(mmol /ml) | 0.18~0.25 |
工作溫度 | 4~40℃ |
耐熱性 | 121℃,水中30min |
最高流速*(cm/h) | 750 |
耐壓(MPa) | 0.3 |
應(yīng)用 | 用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的離子交換層析純化 |
*檢測條件:層析柱16mm×300mm;*柱床高15cm;溫度25℃;流動(dòng)相為0.1mol/L NaCl。
使用方法
3.1 裝柱
裝柱按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作。必須保證每種材料都處于工作溫度,凝膠裝柱前需要脫氣。
3.2平衡
使用2~5倍柱床體積的上樣平衡液平衡柱子,務(wù)必使流出液的電導(dǎo)和pH同上樣緩沖液的電導(dǎo)和pH完全一致。平衡液是低濃度的緩沖溶液,如NaOAC、PBS等。常用的平衡液是0.1mol/L 醋酸緩沖液,pH5.0。
3.3上樣
(1)樣品用平衡液配制,渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。鹽濃度太大的樣品處理后再配。
(2)一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上,用平衡液洗去雜質(zhì),再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。
(3)介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附的程度取決于樣品的帶電性質(zhì)、流動(dòng)相的離子強(qiáng)度和pH值。鹽濃度小,介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附較牢。用 SP層析介質(zhì)時(shí),推薦的pH值是大于目標(biāo)產(chǎn)品等電點(diǎn)1個(gè)單位。
3.4洗脫
可用增大鹽濃度或增大pH值進(jìn)行洗脫,常用增大鹽濃度的辦法洗脫。常用的洗脫液(B液)如:0.1mol/L 醋酸緩沖液+2mol/L NaCl,pH5.0。
3.5再生
一般先用高鹽濃度的緩沖液(含1~2mol/L NaCl)洗或減小pH洗10倍以上柱體積,然后用結(jié)合蛋白時(shí)的平衡液洗到平衡即可。
若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。
3.6在位清洗
(1)對(duì)于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白,可用0.5~1倍柱床體積的2M NaCl去除。
(2)對(duì)于沉淀蛋白、疏水性結(jié)合的蛋白或脂類,可以先用1倍柱床體積的0.1M NaOH沖洗,再用平衡緩沖溶液清洗直至pH呈中性。
(3)對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等,用4~10倍柱床體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗,需注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加,否則容易產(chǎn)生氣泡。
3.7存儲(chǔ)
密封保存在4~30℃(保存溶液為20%乙醇+0.2mol/L乙酸鈉)干燥、通風(fēng)、清潔處,不可冷凍;用過的柱子保存在4~8℃,20%乙醇溶液+0.2mol/L乙酸鈉中。
3.8運(yùn)輸
運(yùn)輸中避免日曬、雨淋、重壓,嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn)。
4.注意事項(xiàng)
(1)柱的選擇:從理論上說,只要柱足夠長,就可以獲得理想的分辨率,但由于層析柱流速同壓力梯度有關(guān),柱長增加使流速減慢,峰變寬,分辨率降低;柱的直徑增加,使液體流動(dòng)的不均勻性增加,分辨率明顯下降。
(2)純化過程必須嚴(yán)格控制洗脫緩沖液的pH及離子強(qiáng)度。樣品與 SP層析介質(zhì)必須用洗脫緩沖液徹底平衡后,才能進(jìn)行柱層析。
(3)所裝的柱床必須表面平整,無溝流及氣泡,否則應(yīng)重裝。
(4)洗脫過程中應(yīng)嚴(yán)格控制流速,且勿過快。
(5)上樣的體積要小,濃度不宜過高。
(6)加樣及整個(gè)洗脫過程中,嚴(yán)防柱面變干。
產(chǎn)品牌號(hào) | 貨號(hào) | 包裝規(guī)格 |
SP Seplife FF | A2043202 | 25ml |
A2043203 | 100ml | |
A2043204 | 500ml | |
A2043205 | 1L | |
A2043206 | 5L | |
A2043207 | 10L |
生產(chǎn)日期:見標(biāo)簽
使用期限:在適當(dāng)?shù)馁A藏條件下可貯藏5年
注冊(cè)人名稱/生產(chǎn)企業(yè):西安藍(lán)曉科技新材料股份有限公司
注冊(cè)人住址/生產(chǎn)地址:西安市高新開發(fā)區(qū)錦業(yè)路135號(hào)藍(lán)曉科技園
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