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          潮州Seplife? LXPM Phenyl 5504M

          基本信息

          疏水層析是利用生物分子表面的疏水性能差異實現(xiàn)分離。在高鹽條件下生物分子吸附在疏水層析介質(zhì)的疏水基團上,降低鹽濃度時,不同蛋白按疏水性從弱到強依次被洗脫,從而達(dá)到分離純化的目的。疏水層析操作條件溫和、分辨率高,是生物大分子分離純化常用的方法之一。
          • 產(chǎn)品描述
          • 產(chǎn)品屬性參數(shù)
          • 說明書
          • 訂貨信息

          疏水層析是利用生物分子表面的疏水性能差異實現(xiàn)分離。在高鹽條件下生物分子吸附在疏水層析介質(zhì)的疏水基團上,降低鹽濃度時,不同蛋白按疏水性從弱到強依次被洗脫,從而達(dá)到分離純化的目的。疏水層析操作條件溫和、分辨率高,是生物大分子分離純化常用的方法之一。

          Seplife? LXPM Phenyl 5504M層析介質(zhì)是以聚丙烯酸酯為基質(zhì),在表面進行了親水性改性再鍵合苯基疏水基團,具有載量高、分辨率高,良好的生物相容性和物理化學(xué)穩(wěn)定性。與傳統(tǒng)層析填料相比,顯著提高了下游純化工藝的生產(chǎn)效率,廣泛應(yīng)用于抗體、蛋白質(zhì)、多肽、核酸等大分子的捕獲、中度純化、精細(xì)純化等純化階段。


          骨架

          聚丙烯酸酯

          外觀

          白色不透明球狀顆粒

          功能基團

          Phenyl

          粒度(μm)

          45-90

          孔徑(?)

          1000

          動態(tài)載量(mg/ml,Lysozyme)

          ≧20

          流速(cm/h)

          100-800

          pH

          2-12

          最大耐壓(bar)

          8

          存儲,防腐劑

          20%乙醇溶液

          再生

          低離子強度的緩沖溶液

          清洗

          0.2-0.5M NaOH溶液(或者50%乙醇)

          穩(wěn)定性

          耐酸、耐堿、不溶于甲醇、乙醇、甲苯、DMSO、DMF、正庚烷等有機溶劑


          使用方法

          3.1 裝柱

          勻漿濃度等于靜置膠體積除以除以勻漿后的總體積。采用0.5M NaCl勻漿可獲得最佳裝柱效果,其濃度為60%-70%。方法如下:

          1)色譜柱的柱體積 V,V=Ac×L,Ac=π×r2。

          Ac:色譜柱橫截面積;L:色譜柱高度;r:色譜柱半徑。

          2) 攪動介質(zhì)形成勻漿液,量取所需質(zhì)量或體積。其為柱體積的1.2倍左右,防止收縮。

          3)用 0.5 M NaCl 溶液置換20%乙醇,平衡過夜。

          4)裝柱之前,用 0.5 M NaCl 溶液調(diào)整勻漿濃度為 65 ~ 70%;將勻漿一次性倒入層析柱,沉降平衡后標(biāo)注高度。

          5)將分配器裝入,調(diào)節(jié)高度使得壓縮系數(shù)為 1.05 ~ 1.10;然后啟動輸液泵,用 1.5~2 倍工作流速使柱床穩(wěn)定。

          6)按照 SOP 進行柱效和對稱性的測定,須達(dá)到預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)。 

          3.2 柱效評價 

          裝好之后,色譜柱用3-5體積超純水清洗。100cm/h流速平衡并進行柱效測試。

          離子交換層析柱的柱效測試方法

          樣品:      2 M NaCl 溶液 

          上樣量:    1~5 % 柱體積 

          洗脫液:    0.5 M NaCl 溶液 

          線性流速:  100 cm/h 

          檢測:      UV @ 280 nm ,2 M NaCl 上樣:電導(dǎo)檢測儀

          3.3 清洗 

          裝好的色譜柱應(yīng)使用至少使用5BV的去離子水清洗。 

          3.4 平衡 

          使用適當(dāng)?shù)?-10倍柱體積緩沖液進行柱子的平衡,至流出液電導(dǎo)和pH不變(與平衡液一致),如:20 mM PBS + 0.5 M NaCl, pH 7.0 平衡。 

          3.5上樣 

          固體樣品可用平衡液溶解配制;低濃度樣品溶液可用平衡液透析;高濃度樣品溶液可用 平衡液稀釋。為了避免堵塞層析柱,樣品應(yīng)經(jīng)離心或膜過濾處理。進料量根據(jù)介質(zhì)的載量和料液中目標(biāo)蛋白的含量計算,上樣前確保樣品緩沖液應(yīng)盡可能與平衡液一致。 

          3.6洗脫 

          上樣完畢后繼續(xù)用平衡緩沖液淋洗至基線穩(wěn)定,可以根據(jù)實際情況采取降低鹽濃度或改變流動相 pH 的方法依次洗脫吸附于層析介質(zhì)上的樣品。 

          3.7再生 

          每次層析之后可用 3~5 BV 低離子強度的緩沖液流速再生層析柱,除去疏水結(jié)合較強(可

          逆結(jié)合)的蛋白,然后用 5 BV 的去離子水清洗,最后 5 BV 平衡緩沖液平衡層析柱。

          3.8 在位清洗 

          為了保持層析柱的性能,若有蛋白質(zhì)或其他雜質(zhì)在再生過程中未能有效去除,可執(zhí)行在位清洗步驟,在位清洗時,也可采用反向沖洗的方法,具體操作步驟如下: 

          (1)對沉淀蛋白、以疏水性結(jié)合的蛋白或脂蛋白,可用 0.2~0.5 M NaOH 清洗(與層析介質(zhì)接觸時間 1 ~ 2 小時),并用 5 BV 以上平衡液和 3 BV 以上的去離子水清洗;

          (2)對強疏水性結(jié)合的蛋白、脂蛋白和脂類物質(zhì),可用 5 BV 以上的 50%乙醇或 30%異丙醇清洗(與層析介質(zhì)接觸時間 0.5~1 小時),并用 5 BV 以上的去離子水清洗。也可以用含非離子表面活性劑的堿性或酸性溶液清洗,如用 0.1~0.5%的 Triton X-100 + 0.1 M 乙酸清洗 1 ~2 小時,并用 5 BV 以上的 50%乙醇沖洗去除去污劑,然后用 5 BV 以上的純水沖洗(使用高濃度的有機溶劑時,為了避免產(chǎn)生氣泡,應(yīng)采用逐步增加有機溶劑濃度的方法)。

          3.9 應(yīng)用案例

          (1)5ml  Seplife? LXPM Phenyl 5504M預(yù)裝柱

          (2)樣品:核糖核酸酶和溶菌酶混樣

          (3)波長:280nm,流速:3ml/min

          (4)洗脫:緩沖液A1:20mM PB+1.5M 硫酸銨,pH7.0

          緩沖液B1:20mM PB,pH7.0

          (5)洗柱溶液:1 M NaOH溶液 超純水

          圖1 Seplife? LXPM Phenyl5504M純化蛋白圖譜

          備注:紅色曲線:Seplife? LXPM Phenyl5504M

          藍(lán)色曲線:某外樣

          4.存儲

          暫時不使用的層析介質(zhì)需保存在 4~30℃ 的 20%乙醇中,已經(jīng)裝好的層析柱應(yīng)保存在含 20%乙醇的緩沖液(pH 7.0);使用前請裝柱后將乙醇清洗干凈。

          5.運輸

          運輸中避免日曬、雨淋、重壓,嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運。


          產(chǎn)品牌號

          貨號

          包裝規(guī)格

          Seplife? LXPM Phenyl5504M

          PM50724M1-1

          25ml

          PM50724M1-2

          100ml

          PM50724M1-3

          500ml

          PM50724M1-4

          1L

           PM50724M1-5

          5L

          PM50724M1-6

          10L

          生產(chǎn)日期:見標(biāo)簽

          使用期限:在適當(dāng)?shù)馁A藏條件下可貯藏5年

          注冊人名稱/生產(chǎn)企業(yè):西安藍(lán)曉科技新材料股份有限公司

          注冊人住址/生產(chǎn)地址:西安市高新開發(fā)區(qū)錦業(yè)路135號藍(lán)曉科技園

          售后服務(wù)單位:西安藍(lán)曉科技新材料股份有限公司

          郵政編碼:710076

          聯(lián)系電話:86-29-8110 4050

          傳真:029-8669 1600-8254

          官方網(wǎng)站:www.sunresin.com

          注冊人名稱/銷售企業(yè):蘇州藍(lán)曉生物科技有限公司

          注冊人地址/銷售地址:蘇州市區(qū)工業(yè)園區(qū)裕新路108號5樓525室

          聯(lián)系電話:0512-65160522


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