Phenyl Seplife FF（LS）層析介質是藍曉科技自主研發(fā)的一種新型疏水層析介質，是將苯基偶聯(lián)到高流速瓊脂糖凝膠過濾層析介質上形成的強疏水性疏水層析分離介質，利用生物分子表面的疏水基團與層析介質上的疏水基團相互作用強弱不同進行分離，廣泛應用于單抗的疏水層析純化。

＊檢測條件：層析柱16mm×300mm；＊柱床高15cm；溫度25℃；流動相為0.1mol/L NaCl。

使用方法

3.1 裝柱

裝柱按照標準操作規(guī)程操作。必須保證每種材料都處于工作溫度，凝膠裝柱前需要脫氣。

3.2平衡

使用2~5倍柱床體積的平衡緩沖溶液平衡柱子，直至流出液的電導和pH同上樣緩沖液的電導和pH完全一致。

3.3上樣

（1）樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過濾以后上樣。

（2）一般情況是讓目標產(chǎn)品結合在柱子上，用平衡液洗去雜質，再選擇一種洗脫液洗下目標產(chǎn)物。

（3）介質對樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質、流動相的離子強度和溫度。鹽濃度大、溫度高或樣品組分疏水性強，介質對組分吸附牢。

3.4洗脫

采用降低鹽濃度使吸附的生物分子被洗脫下來。添加表面活性劑或者有機溶劑可加強洗脫，最常用的是低鹽濃度緩沖液，如0.02~0.05 mol/L的PBS。

3.5 再生

（1）先用蒸餾水按操作流速沖洗3～5個柱床體積，然后用平衡液清洗3～5個柱床體積。

（2）再生時若有失活蛋白質或脂類物質洗不掉，可用在位清洗法除去。

3.6在位清洗

（1）對于以離子鍵結合上去的蛋白，可用0.5~1倍柱床體積的2M NaCl去除。

（2）對于沉淀蛋白、疏水性結合的蛋白或脂類，可以先用1倍柱床體積的0.1M NaOH沖洗，再用平衡緩沖溶液清洗直至pH呈中性。

（3）對強疏水性結合的蛋白、脂類等，用4~10倍柱床體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，需注意有機溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。

3.7存儲

Phenyl Seplife FF（LS）密封保存在4~30℃（保存溶液為20%乙醇）干燥、通風、清潔處，不可冷凍；用過的柱子保存在4~8℃，20%乙醇溶液中。

3.8運輸

運輸中避免日曬、雨淋、重壓，嚴禁與有毒、有害物品混運。

注意事項

（1）典型的配基和蛋白質結合強度由強到弱的順序是：苯基（phenyl）、辛基（octyl）、丁基（butyl）、異丙基（isopropyl）、醚（ether）。如果樣品和介質結合緊密，可更換為弱介質更容易洗脫下來。

（2）在疏水層析中，疏水介質和疏水配基對選擇性影響非常大，以下因素的影響也不可忽視：樣品溶解度、純化規(guī)模、所需規(guī)模的正確配基。

（3）由于強疏水蛋白質和疏水配基結合非常緊密，因此在篩選疏水介質時，如果樣品是強疏水蛋白質，可從低疏水性介質開始，選擇在低鹽濃度下得到最高分辨率和載量的介質。

（4）樣品與Phenyl Seplife FF（LS）（低載量）必須用洗脫緩沖液徹底平衡后，才能進行柱層析。 

（5）采用1/5層析柱的總結合載量，可在梯度洗脫時得到優(yōu)化的分離。

（6）所裝的柱床必須表面平整，無溝流及氣泡，否則應重裝。

（7）若是大規(guī)模純化和捕獲蛋白，采用非連續(xù)（間隔式）濃度變化洗脫，可以減少分離時間和緩沖液用量。

（8）洗脫過程中應嚴格控制流速，且勿過快。

（9）加樣及整個洗脫過程中，嚴防柱面變干。

生產(chǎn)日期：見標簽

使用期限：在適當?shù)馁A藏條件下可貯藏5年

注冊人名稱/生產(chǎn)企業(yè)：西安藍曉科技新材料股份有限公司

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