Seplife G25 F葡聚糖層析介質(zhì)是一種具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子化合物,它是由葡聚糖加入交聯(lián)劑環(huán)氧氯丙烷通過(guò)醚鍵互相交聯(lián)聚合而成,交聯(lián)度越大,網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)就越緊密,吸水后的體積膨脹就越小,能允許進(jìn)入層析介質(zhì)內(nèi)部的分子的分子量也就越小,反之亦然。層析時(shí),大于層析介質(zhì)孔徑的大分子,被阻于凝膠相外,沿著層析介質(zhì)顆粒之間的間隙走,下移速度最快,故最先洗脫下來(lái),中等大小的分子進(jìn)入部分層析介質(zhì)孔中,洗脫速度次之,而小分子因?yàn)槟軌蜻M(jìn)入全部層析介質(zhì)孔中,受到阻力最大,故最后被洗脫下來(lái),由此,物質(zhì)得到分離和純化。Seplife G25葡聚糖層析介質(zhì)分離范圍為1000~5000,適用于脫鹽、肽與其它小分子的分離。
產(chǎn)品牌號(hào) | Seplife G25 F |
外觀 | 白色球狀,無(wú)臭無(wú)味 |
粒徑(干,μm) | 20~80 |
粒徑(濕,μm) | 40~140 |
溶脹度 | 4~6ml/g干粉 |
耐壓(MPa) | 0.24 |
最高流速(cm/h) | 480 |
pH穩(wěn)定性 | 2~13 |
化學(xué)穩(wěn)定性 | 在以下溶液中穩(wěn)定:6M鹽酸胍;8M尿素;24%乙醇;0.2M NaOH;0.2M HCl;1M乙酸;1% SDS;30%異丙醇;30%乙腈 |
應(yīng)用 | 分離范圍為1000~5000,適用于脫鹽、肽與其它小分子的分離 |
交聯(lián)葡聚糖凝膠微球G25的排阻極限測(cè)定
Seplife G25排阻極限
樣品 | 保留體積(ml) | 分子量 | Log M | Kav |
芐醇 | 114.81 | 108 | 2.03 | 1.00 |
PEG400雙芐基醚 | 98.43 | 580 | 2.76 | 0.80 |
PEG600雙芐基醚 | 81.60 | 780 | 2.89 | 0.60 |
PEG1000雙芐基醚 | 65.72 | 1180 | 3.07 | 0.40 |
PEG1540雙芐基醚 | 55.14 | 1620 | 3.21 | 0.28 |
PEG4000雙芐基醚 | 33.81 | 4180 | 3.62 | 0.02 |
PEG6000雙芐基醚 | 32.64 | 6180 | 3.79 | 0.00 |
PEG7000雙芐基醚 | 32.63 | 7180 | 3.86 | 0.00 |
PEG10000雙芐基醚 | 32.42 | 10180 | 4.01 | 0.00 |
PEG20000雙芐基醚 | 32.41 | 20180 | 4.31 | 0.00 |
使用方法
4.1預(yù)處理
葡聚糖凝膠過(guò)濾層析介質(zhì)一般是干粉狀態(tài),使用前必須在過(guò)剩的緩沖溶液中進(jìn)行溶脹(室溫溶脹過(guò)夜,或者在沸水中溶脹1h,避免使用磁力攪拌、藥匙或者玻璃棒攪拌造成填料損壞)。溶脹后,使用緩沖液進(jìn)行調(diào)節(jié),形成濃稠的漿液,75%(體積百分比)左右,再進(jìn)行脫氣。
4.2 裝柱
裝柱按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作。裝柱前,必須保證每種材料都處于工作溫度,緩沖液、填料的溫度須一致(室溫)。葡聚糖凝膠過(guò)濾層析介質(zhì)遵從Darcy法則,如果流速加倍,則柱壓也會(huì)加倍。
4.3平衡
使用2~5倍柱床體積的上樣平衡液平衡柱子,務(wù)必使流出液的電導(dǎo)和pH同上樣緩沖液的電導(dǎo)和pH完全一致。
4.4上樣
(1)介質(zhì)對(duì)樣品組分的分離是按組分分子量大小進(jìn)行的,分子量大的先流出來(lái)。
(2)凝膠過(guò)濾的上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積,視分離情況可以調(diào)整;脫鹽時(shí)上樣量可以達(dá)到20%的柱床體積,柱高的選擇也與分離要求相關(guān),柱高控制在40-50 cm 以下,過(guò)高的凝膠層會(huì)引起較大的反壓,應(yīng)當(dāng)盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制,脫鹽時(shí)高徑比為5:1即可。
(3)樣品中如有雜質(zhì)或沉淀應(yīng)該在上樣前過(guò)濾或離心除去,樣品的粘度不能過(guò)高,否則影響分離效果。
4.5洗脫
可以采用無(wú)鹽水,也可以采用用平衡緩沖液做洗脫劑進(jìn)行洗脫。在平衡緩沖液中加入NaCl等梯度洗脫或者鹽梯度洗脫都可以完全分離。
4.6在位清洗
凝膠使用10次后作一次CIP,目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗4個(gè)柱床體積,再以至少3個(gè)柱床體積平衡緩沖液再生。
4.7存儲(chǔ)
干粉保存在4~30℃,干燥、通風(fēng)、清潔處;溶脹后的介質(zhì)保存在4~8℃,20%乙醇溶液中,避免與氧化劑接觸,不可冷凍。
4.8運(yùn)輸
運(yùn)輸中避免日曬、雨淋、重壓,嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn)。
5.注意事項(xiàng)
(1)樣品必須澄清沒(méi)有顆粒。
(2)樣品與層析介質(zhì)必須用洗脫緩沖液徹底平衡后,才能進(jìn)行柱層析。
(3)所裝的柱床必須表面平整,無(wú)溝流及氣泡,否則應(yīng)重裝。
(4)洗脫過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格控制流速,且勿過(guò)快。
(5)加樣及整個(gè)洗脫過(guò)程中,嚴(yán)防柱面變干。
(6)本品應(yīng)避免與氧化劑接觸,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中。
產(chǎn)品牌號(hào) | 貨號(hào) | 包裝規(guī)格 |
Seplife G25 F | D1007210F | 25g |
D1007211F | 100g | |
D1007212F | 500g | |
D1007213F | 1kg | |
D1007214F | 5kg | |
D1007215F | 10k |
生產(chǎn)日期:見標(biāo)簽
使用期限:在適當(dāng)?shù)馁A藏條件下可貯藏5年
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