Seplife? LXPM DEAE 5504M 層析介質(zhì)是以聚丙烯酸酯為基質(zhì)，在表面進(jìn)行了親水性改性再鍵合了弱堿性離子交換基團(tuán)，具有載量高、化學(xué)穩(wěn)定性好、機(jī)械強(qiáng)度大、非特異性吸附小等特點，具有卓越的生物相容性和柱床穩(wěn)定性，可以提供更快的流速，特別適合大規(guī)模制備的應(yīng)用，顯著提高了下游純化工藝的生產(chǎn)效率，可以降低成本，創(chuàng)造較好的經(jīng)濟(jì)效益，廣泛應(yīng)用于抗體、蛋白質(zhì)、多肽、核酸（寡核苷酸）、病毒，胰島素等生物分子的捕獲、中度純化、精細(xì)純化。  

使用方法

3.1 裝柱

勻漿濃度等于靜置膠體積除以除以勻漿后的總體積。采用0.5M NaCl勻漿可獲得最佳裝柱效果，其濃度為60%-70%。方法如下：

1)色譜柱的柱體積 V，V=Ac×L，Ac=π×r2。

Ac：色譜柱橫截面積；L:色譜柱高度；r：色譜柱半徑。

2) 攪動介質(zhì)形成勻漿液，量取所需質(zhì)量或體積。其為柱體積的1.2倍左右，防止收縮。

3）用 0.5 M NaCl 溶液置換20%乙醇，平衡過夜。

4）裝柱之前，用 0.5 M NaCl 溶液調(diào)整勻漿濃度為 65 ~ 70%；將勻漿一次性倒入層析柱，沉降平衡后標(biāo)注高度。

5）將分配器裝入，調(diào)節(jié)高度使得壓縮系數(shù)為 1.05 ~ 1.10；然后啟動輸液泵，用 1.5~2 倍工作流速使柱床穩(wěn)定。

6）按照 SOP 進(jìn)行柱效和對稱性的測定，須達(dá)到預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)。 

3.2 柱效評價 

裝好之后，色譜柱用3-5體積超純水清洗。100cm/h流速平衡并進(jìn)行柱效測試。

離子交換層析柱的柱效測試方法

樣品：      2 M NaCl 溶液 

上樣量：    1~5 % 柱體積 

洗脫液：    0.5 M NaCl 溶液 

線性流速：  100 cm/h 

檢測：      UV @ 280 nm ,2 M NaCl 上樣：電導(dǎo)檢測儀

3.3 清洗 

裝好的色譜柱應(yīng)使用至少使用5BV的去離子水清洗。 

3.4 平衡 

使用適當(dāng)?shù)?-10倍柱體積緩沖液進(jìn)行柱子的平衡，至流出液電導(dǎo)和PH不變（與平衡液一致），緩沖液 如 Buffer A，如 20 mM PBS, pH7.0，具體的緩沖體系應(yīng)根據(jù)目標(biāo)蛋白的穩(wěn)定性和等電點、離 子交換介質(zhì)的種類進(jìn)行篩選和優(yōu)化。 

3.5上樣 

固體樣品可用平衡液溶解配制；低濃度樣品溶液可用平衡液透析；高濃度樣品溶液可用平衡液稀釋。為了避免堵塞層析柱，樣品應(yīng)經(jīng)離心或膜過濾處理。進(jìn)料量根據(jù)介質(zhì)的載量和料液中目標(biāo)蛋白的含量計算，上樣前確保樣品緩沖液應(yīng)盡可能與平衡液一致。 

3.6洗脫 

上樣完畢后繼續(xù)用平衡緩沖液淋洗至基線穩(wěn)定，可以根據(jù)實際情況采取提高鹽濃度或改變流動相 pH 的方法依次洗脫吸附于層析介質(zhì)上的樣品。 

3.7再生 

每次層析之后可用0.5-2 M NaCl 清洗層析柱，除去強(qiáng)結(jié)合于層析介質(zhì)上的蛋白。 

3.8 在位清洗 

為了保持層析柱的性能，若有蛋白質(zhì)或其他雜質(zhì)在再生過程中未能有效去除，可執(zhí)行在位清洗步驟，在位清洗時，也可采用反向沖洗的方法，具體操作步驟如下： 

（1）對于通過離子鍵結(jié)合過強(qiáng)的蛋白，可用3BV以上的2M NaCl 清洗，并用3BV以上的去離子水清洗； 

（2）對沉淀蛋白、以疏水性結(jié)合的蛋白或脂蛋白，可用0.2~0.5 M NaOH 清洗（與層析介質(zhì)接觸時間 1~2 h），并用5BV以上平衡液和3BV以上的去離子水清洗； 

（3）對強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂蛋白和脂類物質(zhì)，可用5BV以上的50%乙醇或 30%異丙醇 清洗（與層析介質(zhì)接觸時間0.5-1 h），并用 5 BV 以上的去離子水清洗。也可用含非離子表面活性劑的堿性或酸性溶液清洗，如0.1~0.5%的 Triton X-100 + 0.1 M乙酸清洗 1-2 h，并用5BV以上的50%乙醇沖洗去除去污劑，然后用5BV以上的純水沖洗（使用高濃度的有機(jī)溶劑時，為了避免產(chǎn)生氣泡，應(yīng)采用逐步增加有機(jī)溶劑濃度的方法）。

3.9 應(yīng)用案列

（1）5ml Seplife? LXPM DEAE 5504M預(yù)裝柱

（2）樣品：20 mg/ml 糜蛋白酶（粗品）

（3）波長：280nm，流速：3ml/min

（4）洗脫：緩沖液A1：50mMTris-HCL溶液，pH10.0

緩沖液B1：50mMTris-HCL溶液+1M NaCL，pH10.

（5）洗柱溶液：1 M NaOH溶液 超純水

圖1.Seplife? LXPM DEAE 5504M與某外樣分離粗糜樣品色譜圖疊加

4.存儲

暫時不使用的層析介質(zhì)需保存在 4～30℃ 的 20%乙醇中，已經(jīng)裝好的層析柱應(yīng)保存在含 20%乙醇的緩沖液(pH 7.0)；使用前請裝柱后將乙醇清洗干凈。

5.運(yùn)輸

運(yùn)輸中避免日曬、雨淋、重壓，嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn)。

生產(chǎn)日期：見標(biāo)簽

使用期限：在適當(dāng)?shù)馁A藏條件下可貯藏5年

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