rProtein A Seplife Suni

基本信息

rProtein A Seplife Suni是藍(lán)曉科技應(yīng)對抗體客戶需求推出的Protein A親和層析填料，以球形，高交聯(lián)瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，通過自主創(chuàng)新技術(shù)將耐堿性重組蛋白A鍵合到該基質(zhì)上。可以特異性地與抗體的Fc區(qū)結(jié)合，用于抗體（單抗和多抗）的分離純化，只需一步親和層析，即可從腹水、血清或培養(yǎng)液等樣品中得到高純度的抗體。

產(chǎn)品描述
產(chǎn)品屬性參數(shù)
說明書
訂貨信息

rProtein A Seplife Suni是藍(lán)曉科技應(yīng)對抗體客戶需求推出的Protein A親和層析填料，以球形，高交聯(lián)瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，通過自主創(chuàng)新技術(shù)將耐堿性重組蛋白A鍵合到該基質(zhì)上?？梢蕴禺愋缘嘏c抗體的Fc區(qū)結(jié)合，用于抗體（單抗和多抗）的分離純化，只需一步親和層析，即可從腹水、血清或培養(yǎng)液等樣品中得到高純度的抗體。

產(chǎn)品技術(shù)參數(shù)

產(chǎn)品名稱	rProtein A Seplife Suni
外觀	球狀凝膠，無臭無味
基質(zhì)	高交聯(lián)瓊脂糖微球
配基	耐堿重組Protein A
流速（cm/h）	＞300cm/h（0.1MPa）
耐壓（MPa）	0.3MPa
粒徑D50（μm）	90m
載量	50mg/ml
配基密度	5~6mg/ml
耐堿性	0.1-0.5M NaOH

載量和駐留時(shí)間關(guān)系

壓力流速曲線

備注：層析柱規(guī)格：16mm×400mm

耐堿測試

層析柱測試完DBC(10%流穿)后，用0.5M NaOH洗脫15min，室溫下放置24h，然后測試DBC變化。

填料名稱	泡堿前DBC(mg/ml)	泡堿后DBC(mg/ml)	下降百分比%
國外品牌	40.51	31.59	22.1
rProtein A Seplife Suni	49.10	39.38	19.8

抗體純化應(yīng)用

某抗體發(fā)酵液純化過程，從載量，純度，收率，洗脫體積等方面平行對比國外品牌LX，結(jié)果表明各方面數(shù)據(jù)與參比填料接近。

實(shí)驗(yàn)條件：

儀器	AKTA Pure 150
層析柱	r-ProteinA Seplife Suni(Hitrap 1ml預(yù)裝柱)
預(yù)平衡	20mM PB+150mM NaCl，pH7.4
淋洗	20mM PB+150mM NaCl，pH7.4
洗脫	100mM檸檬酸鈉，pH3.0
CIP	0.5M NaOH

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

填料名稱	載量(mg/ml)	SEC純度(%)	收率(%)
國外品牌LX	46.8	95.6	98.2
rProtein A Seplife Suni	45.5	95.9	99.1

使用方法

3.1 裝柱

裝柱按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作，必須保證每種材料都處于工作溫度。r-ProteinA Seplife Suni填料可使用常規(guī)瓊脂糖軟膠裝柱方法。

3.2平衡

用3-5CV預(yù)平衡液平衡層析柱，直至pH和電導(dǎo)率保持不變。

3.3上樣

樣品的預(yù)處理：樣品離心后，用0.45μm濾膜過濾，然后上樣，以免堵塞層析柱。上樣量根據(jù)樣品的性質(zhì)和層析介質(zhì)的量進(jìn)行選擇，一般可通過測試該樣品在層析柱上的DBC作為參考。

3.4洗脫

一般利用低pH緩沖液進(jìn)行洗脫，選擇pH3.0-3.5的緩沖液：如0.1mol/L甘氨酸-HCl，pH3.0，實(shí)際洗脫條件可優(yōu)化。洗脫后，應(yīng)立刻中和緩沖液，將收集到的抗體溶液中和至中性（pH7.4左右），以維持抗體的生物活性，一般中和液為1mol/L Tris-HCl，pH9-10。

3.5清洗

CIP方法：

r-ProteinA Seplife Suni是一種耐堿親和介質(zhì)，可以耐受 0.1M-0.5M NaOH溶液的清洗，一般使用大于3CV的 0.1–0.5 M NaOH，接觸時(shí)間為15 min；然后用5CV的平衡液沖洗至中性。

注：由于發(fā)酵液純化過程會引入部分雜質(zhì)吸附在層析柱上，造成壓力升高，在做CIP時(shí)，可考慮一定次數(shù)后進(jìn)行up flow。

3.6存儲

密封保存在4~8℃（保存溶液為20%乙醇）干燥、通風(fēng)、清潔處，不可冷凍；用過的柱子保存在4~8℃，20%乙醇溶液中。

3.7運(yùn)輸

運(yùn)輸中避免日曬、雨淋、重壓，嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn)。

4.注意事項(xiàng)

（1）該介質(zhì)從冷室或冰箱中取出后最好在室溫下恢復(fù)到室溫，然后緩慢搖勻后裝柱，以免產(chǎn)生氣泡影響柱效；

（2）一般Protein A親和層析填料裝柱高度15-25cm，根據(jù)實(shí)際情況做合理的高度選擇；

（3）發(fā)酵液上樣前做好澄清過濾操作，以防堵塞層析柱；