Seplife G25 M

基本信息

Seplife G25 M葡聚糖層析介質(zhì)是一種具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子化合物，它是由葡聚糖加入交聯(lián)劑環(huán)氧氯丙烷通過醚鍵互相交聯(lián)聚合而成，交聯(lián)度越大，網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)就越緊密，吸水后的體積膨脹就越小，能允許進(jìn)入層析介質(zhì)內(nèi)部的分子的分子量也就越小，反之亦然。層析時(shí)，大于層析介質(zhì)孔徑的大分子，被阻于凝膠相外，沿著層析介質(zhì)顆粒之間的間隙走，下移速度最快，故最先洗脫下來，中等大小的分子進(jìn)入部分層析介質(zhì)孔中，洗脫速度次之……

產(chǎn)品描述
產(chǎn)品屬性參數(shù)
說明書
訂貨信息

產(chǎn)品牌	Seplife G25 M
外觀	白色球狀，無臭無味
粒徑（干，μm）	50～150
粒徑（濕，μm）	70～250
溶脹度	4~6ml/g干粉
耐壓（MPa）	0.24
最高流速（cm/h）	480
pH穩(wěn)定性	2~13
化學(xué)穩(wěn)定性	在以下溶液中穩(wěn)定：6M鹽酸胍；8M尿素；70%乙醇；0.2M NaOH；0.2M HCl；1M乙酸；1% SDS；30%異丙醇；30%乙腈
應(yīng)用	分離范圍為1000~5000，適用于脫鹽、肽與其它小分子的分離

交聯(lián)葡聚糖凝膠微球G25的排阻極限測(cè)定

Seplife G25排阻極限

樣品	保留體積(ml)	分子量	Log M	Kav
芐醇	114.81	108	2.03	1.00
PEG400雙芐基醚	98.43	580	2.76	0.80
PEG600雙芐基醚	81.60	780	2.89	0.60
PEG1000雙芐基醚	65.72	1180	3.07	0.40
PEG1540雙芐基醚	55.14	1620	3.21	0.28
PEG4000雙芐基醚	33.81	4180	3.62	0.02
PEG6000雙芐基醚	32.64	6180	3.79	0.00
PEG7000雙芐基醚	32.63	7180	3.86	0.00
PEG10000雙芐基醚	32.42	10180	4.01	0.00
PEG20000雙芐基醚	32.41	20180	4.31	0.00

使用方法

4.1預(yù)處理

葡聚糖凝膠過濾層析介質(zhì)一般是干粉狀態(tài)，使用前必須在過剩的緩沖溶液中進(jìn)行溶脹（室溫溶脹過夜，或者在沸水中溶脹1h，避免使用磁力攪拌、藥匙或者玻璃棒攪拌造成填料損壞）。溶脹后，使用緩沖液進(jìn)行調(diào)節(jié)，形成濃稠的漿液，75%（體積百分比）左右，再進(jìn)行脫氣。

4.2 裝柱

裝柱按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作。裝柱前，必須保證每種材料都處于工作溫度，緩沖液、填料的溫度須一致（室溫）。葡聚糖凝膠過濾層析介質(zhì)遵從Darcy法則，如果流速加倍，則柱壓也會(huì)加倍。

4.3平衡

使用2~5倍柱床體積的上樣平衡液平衡柱子，務(wù)必使流出液的電導(dǎo)和pH同上樣緩沖液的電導(dǎo)和pH完全一致。

4.4上樣

（1）介質(zhì)對(duì)樣品組分的分離是按組分分子量大小進(jìn)行的，分子量大的先流出來。

（2）凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積，我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積，視分離情況可以調(diào)整；脫鹽時(shí)上樣量可以達(dá)到20%的柱床體積，柱高的選擇也與分離要求相關(guān)，柱高控制在40-50 cm 以下，過高的凝膠層會(huì)引起較大的反壓，應(yīng)當(dāng)盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制，脫鹽時(shí)高徑比為5：1即可。

（3）樣品中如有雜質(zhì)或沉淀應(yīng)該在上樣前過濾或離心除去，樣品的粘度不能過高，否則影響分離效果。

4.5洗脫

可以采用無鹽水，也可以采用用平衡緩沖液做洗脫劑進(jìn)行洗脫。在平衡緩沖液中加入NaCl等梯度洗脫或者鹽梯度洗脫都可以完全分離。

4.6在位清洗

凝膠使用10次后作一次CIP，目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗4個(gè)柱床體積，再以至少3個(gè)柱床體積平衡緩沖液再生。

4.7存儲(chǔ)

干粉保存在4~30℃，干燥、通風(fēng)、清潔處；溶脹后的介質(zhì)保存在4~8℃，20%乙醇溶液中，避免與氧化劑接觸，不可冷凍。

4.8運(yùn)輸

運(yùn)輸中避免日曬、雨淋、重壓，嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn)。

5.注意事項(xiàng)

（1）樣品必須澄清沒有顆粒。

（2）樣品與層析介質(zhì)必須用洗脫緩沖液徹底平衡后，才能進(jìn)行柱層析。