層析介質(zhì)隨著其重復(fù)的裝柱,重復(fù)接觸待純化的樣品,層析工藝過(guò)程的各種緩沖液,維護(hù)保養(yǎng)(再生,清洗CIP,消毒,保存)過(guò)程而使其動(dòng)態(tài)載量及收率下降,非特異性吸附反壓增大的變化導(dǎo)致的壽命衰減或者終止。
層析介質(zhì)壽命的衰減會(huì)影響整個(gè)工藝過(guò)程的成本,且衰減導(dǎo)致介質(zhì)性能的變化而不能持續(xù)有效的滿足工藝要求。下面我們一起了解層析介質(zhì)的影響因素;
?重復(fù)裝柱
層析過(guò)程是介質(zhì)裝填在層析柱中,由于層析體系的漏氣,層析柱密封圈的更換等因素導(dǎo)致的必須拆裝柱,每次裝柱的過(guò)程都涉及到介質(zhì)的脫氣處理,及裝填柱床時(shí)的壓縮柱床,然后脫氣時(shí)的超聲或者抽濾都會(huì)對(duì)介質(zhì)施壓,壓縮柱床也要對(duì)介質(zhì)施壓,反復(fù)的施壓及壓力控制不當(dāng)也會(huì)使介質(zhì)的物理性能發(fā)生變化從而影響介質(zhì)的壽命。
?樣品的狀態(tài)
a.樣品澄清度:樣品越澄清對(duì)介質(zhì)的壽命影響越小。樣品固形物及膠懸物進(jìn)入柱床,是介質(zhì)板結(jié)或者進(jìn)行介質(zhì)的孔道,使介質(zhì)的結(jié)構(gòu)遭到破壞,從而加速介質(zhì)壽命的衰減。
b.樣品粘度:樣品的粘度越小,對(duì)介質(zhì)壽命的影響越小。粘度大的樣品在柱床中通常需要更大的壓力促進(jìn)樣品在柱床中的遷移,施壓的壓力越大介質(zhì)壽命衰減的越快。
c.樣品酸堿度:過(guò)酸過(guò)堿都會(huì)加速介質(zhì)壽命的衰減。
d.樣品離子強(qiáng)度:離子強(qiáng)度越高介質(zhì)壽命衰減的越快。
e.樣品成分組成:樣品成分越復(fù)雜,層析過(guò)程越復(fù)雜,介質(zhì)的壽命衰減越快。樣品組分越復(fù)雜,意味著層析過(guò)程需要更多的洗脫方式或者CIP時(shí)需要的條件更劇烈,從而加速介質(zhì)壽命的衰減。
?層析工藝
a.柱床高度,流速及反壓越大,工藝過(guò)程介質(zhì)受到的外力就會(huì)增大,介質(zhì)的壽命衰減就會(huì)增大。
b.層析工藝過(guò)程的緩沖液的種類及洗脫的CV數(shù)也會(huì)影響介質(zhì)的壽命,緩沖液越溫和對(duì)介質(zhì)壽命衰減影響越小,洗脫CV數(shù)越小對(duì)介質(zhì)壽命衰減影響越小。
?維護(hù)保養(yǎng)
a.合理的維護(hù)保養(yǎng)過(guò)程可以降低介質(zhì)壽命的衰減,但是維護(hù)過(guò)程的CIP及消毒過(guò)程通常都需要?jiǎng)×业臈l件,如強(qiáng)酸強(qiáng)堿等,所以CIP的強(qiáng)度及頻率越大對(duì)介質(zhì)的壽命衰減影響越大。
b.既要及時(shí)對(duì)介質(zhì)進(jìn)行維護(hù)保養(yǎng),又要避免清洗過(guò)程對(duì)介質(zhì)壽命的影響,故而層析工藝過(guò)程中CIP策略是非常重要的組成部分。
c.層析介質(zhì)的保存方式(溫度,環(huán)境,保存液等)也影響介質(zhì)的壽命衰減。
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