宿主細胞蛋白（host cell proteins,HCPs)是基因工程菌株細胞株產生的與基因工程目的產物——抗體蛋白及Fc融合蛋白無關的蛋白混合物，HCP的組成與豐度在各工序階段與最終產品都各自不同，其決定與許多不同因素。HCP是影響產品純度的重要因素，使用含有HCP的重組治療性藥物，有可能引起機體的過敏反應，而且具有潛在的“佐劑效應”進而影響藥物的療效，所以治療性抗體藥對HCP殘留有很高的要求。

治療性抗體藥物及Fc融合蛋白已成為生物醫(yī)藥領域市場最主要的產品類別。Protein A親和層析作為第一步捕獲抗體最為有效的手段仍然在現(xiàn)有抗體純化平臺中占據主導地位。

Protein A親和層析由于其對IgG的Fc片段高度特異性，通常用于澄清后原液抗體及Fc融合蛋白直接捕獲。親和樹脂的高度選擇性讓大多數非目標蛋白流穿。此外，由于其對抗體的高度親和，低pH（3.0-3.5）的條件才能將其洗脫。因此，親和層析是下游工藝中最有效的去除HCP的單元操作。這一單獨步驟可以去除澄清收獲液中>90%的HCP。但是，盡管親和層析能高效去除HCP，根據原料不同，親和洗脫液中HCP的水平也有很大差異。

HCP和Protein A親和介質的非特異性結合

這種非特異性作用，通?？梢杂脙煞N方法進行優(yōu)化，以減少洗脫后HCP含量高。

弱洗脫：

Protein A親和介質結合抗體就Fc融合蛋白后，低pH（3.0-3.5）的條件才能將其洗脫，我們可以嘗試用弱洗脫的方式，比如用含有0.1-1M精氨酸pH3.5-5.0的緩沖液洗脫，讓結合在親和介質上的抗體蛋白先洗脫下來，而HCP仍在結合在介質上，洗脫后再通過再生的方式去除結合再介質上的HCP。

上樣后清洗：

較低的pH清洗，pH5-5.5

堿性緩沖液清洗，pH8-10

含添加劑的緩沖液清洗

常用添加劑及添加濃度

上樣后洗脫前，采用上面的方式，通?？梢杂行p少HCP和親和介質的非特異作用帶來的洗脫后HCP殘留高。

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性能參數

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載量與駐留時間的關系

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和國外品牌對比

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抗體蛋白——HCP作用

一些團隊已經證明，HCP和Protein A親和介質間的非特異性作用對HCP殘留起到很小的作用，然而抗體-HCP間的作用卻是親和洗脫液中HCP水平不同的主要原因。關聯(lián)HCPs可能通過多種機制與單抗結合，包括靜電作用，疏水作用和氫鍵，所以打破這些作用的試劑可以用來有效地去除HCP。常用試劑同上面表格中的添加劑。

大多數CHO HCPs等電點在4.5-7.0，在酸性pH條件下，單抗通常是電中性或帶正電而絕大多數HCP是電中性或帶負電，因此單抗和HCPs間形成很強的疏水作用和靜電作用。在堿性pH條件下(>8)，單抗和大多數的HCP是帶負電的，靜電作用被轉換成排斥力。抗體在相對較高的pH條件下通?？删S持穩(wěn)定，但是pH高于10，會產生天冬酰胺殘基脫氨作用。因此推薦使用pH8-10之間的緩沖液。

抗體蛋白——HCP作用

一些團隊已經證明，HCP和Protein A親和介質間的非特異性作用對HCP殘留起到很小的作用，然而抗體-HCP間的作用卻是親和洗脫液中HCP水平不同的主要原因。關聯(lián)HCPs可能通過多種機制與單抗結合，包括靜電作用，疏水作用和氫鍵，所以打破這些作用的試劑可以用來有效地去除HCP。常用試劑同上面表格中的添加劑。

大多數CHO HCPs等電點在4.5-7.0，在酸性pH條件下，單抗通常是電中性或帶正電而絕大多數HCP是電中性或帶負電，因此單抗和HCPs間形成很強的疏水作用和靜電作用。在堿性pH條件下(>8)，單抗和大多數的HCP是帶負電的，靜電作用被轉換成排斥力?？贵w在相對較高的pH條件下通?？删S持穩(wěn)定，但是pH高于10，會產生天冬酰胺殘基脫氨作用。因此推薦使用pH8-10之間的緩沖液。

參考資料：

Please cite this article as: Y. Li, Effective strategies for host cell protein clearance in downstream processing of monoclonal antibodies and Fc-fusion proteins, Protein Expression and Purification (2017), doi: 10.1016/j.pep.2017.04.006