山西蛋白純化聯(lián)系電話地址
發(fā)布時(shí)間：2023-08-25 01:45:14
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DEAE-52和DEAE-FF有什么區(qū)別：兩者都是弱陰離子填料。DEAE-52是纖維素基質(zhì)，平均粒徑50um，DEAE-FF是瓊脂糖基質(zhì)，中心粒徑90um。同樣的上樣流速前者反壓明顯大于后者，無法滿足工業(yè)化生產(chǎn)需求，現(xiàn)在市面上很少有提供DEAE-52的，工業(yè)化生產(chǎn)都在用DEAE-FF或者更高剛性的，兩者選擇的話，強(qiáng)烈推薦使用DEAE-FF。
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Seplife?IEX離子交換層析填料是采用獨(dú)有的聚合物合成技術(shù)制備出以聚甲基丙烯酸酯為骨架的微球。該聚合物微球經(jīng)過表面親水性改造以增加親水性，再通過化學(xué)合成的方法鍵合不同的離子交換基團(tuán)。由于其良好的親水性和較好的物理、化學(xué)穩(wěn)定性及剛性結(jié)構(gòu)，使得離子交換層析填料具有良好的生物相溶性及使用壽命，并提高純化效率。
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建立蛋白質(zhì)純化工藝時(shí)，最重要的是需要考慮純化得到的蛋白質(zhì)應(yīng)能滿足其后續(xù)應(yīng)用要求。蛋白質(zhì)的含量及純度都必須滿足應(yīng)用要求。而且，因?yàn)楹罄m(xù)應(yīng)用需要的是保持良好折疊結(jié)構(gòu)的活性蛋白質(zhì)，因此蛋白質(zhì)活性的相關(guān)信息也需要考慮。在純化及后續(xù)的保存過程中，很多處理方法都會(huì)對蛋白質(zhì)的性質(zhì)產(chǎn)生影響，如蛋白質(zhì)的去折疊、聚集、降解和失活等。制定詳細(xì)計(jì)劃，在最短時(shí)間內(nèi)完成蛋白質(zhì)純化，并在最穩(wěn)定的條件下進(jìn)行保存才算是成功地完成了其整個(gè)純化過程。
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His-Tag純化時(shí)金屬螯合介質(zhì)的選擇：1、科研微量制備——Ni Seplife HP（IDA)，此層析填料分辨率高，科研微量制備可用此填料純化，純度更高。2、樣品中含有DTT或EDTA——Ni Seplife FF(TED),此填料可以耐受100mM的EDTA及10mM的DTT,樣品中含有EDTA及DTT時(shí)無需換液直接過鎳柱純化。3、樣品中含有8M尿素（6M鹽酸胍）——Ni Seplife FF(NTA),IDA耐受性差，TED結(jié)合力弱，在含有高濃度尿素時(shí)結(jié)合效率差，所以含有變性劑的樣品首選IMAC的鎳柱。
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層析介質(zhì)壽命驗(yàn)證的原則：壽命驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)必須能夠完全反映商業(yè)化生產(chǎn)規(guī)模的性能。壽命驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)必要體現(xiàn)商業(yè)化生產(chǎn)規(guī)模之間的相關(guān)性。a.在設(shè)計(jì)小試驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)時(shí)需保證層析過程放大因素和中試及生產(chǎn)規(guī)模保持一致的因素完全一致，可根據(jù)層析過程中的可線性方大因素設(shè)計(jì)試驗(yàn)規(guī)模及層析柱和層析系統(tǒng)的選型。b.避免層析過程影響因素對結(jié)果的影響。設(shè)計(jì)小試實(shí)驗(yàn)室必須在生產(chǎn)所要求的環(huán)境溫度及潔凈車間進(jìn)行，并且嚴(yán)格執(zhí)行過程SOP，且要對過程進(jìn)行可靠的監(jiān)管。
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層析填料被污染或老化：隨著填料的使用，一些雜質(zhì)的積累會(huì)使層析填料的孔徑發(fā)生變化（如堵塞，非特異性吸附積累，微生物污染，破碎等），導(dǎo)致其排阻能力發(fā)生偏差而影響分離度。此時(shí)可對填料進(jìn)行CIP清洗，若清洗后還不能達(dá)到分離要求，就要更換新的填料。